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动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生、发展和转归是一个非常复杂的过程，其重要的病理基础是内皮细胞受损。内皮细胞受损后，可引发单核细胞、T淋巴细胞、粒细胞等与血管内膜粘附，引起血管炎症反应，导致脂质沉积、平滑肌细胞移行增殖、单核／巨噬细胞吞噬脂质形成泡沫细胞、血小板粘附形成血栓等一系列级联反应，最终形成AS斑块。因此深入探讨内皮细胞受损后代谢和功能的改变将为AS的防治提供重要的理论依据。内皮脂酶(endothelial lipase，EL)是1999年发现的脂肪酶家族成员，正常内皮细胞EL基因呈低水平表达，在受各种致AS因素作用后，EL表达量明显增高。细胞、动物试验和尸体解剖结果提示EL可能在AS的发病中起着重要作用，但机制不明。在冠心病(coronary artery disease，CAD)患者内皮细胞中是否存在EL的表达、内皮细胞表达EL与冠脉病变的关系如何尚未见报道。EL可促进单核细胞与血管内膜粘附，它是否可通过影响血管内皮细胞表达粘附分子，影响炎性细胞粘附参与AS的发生尚不清楚。另外，EL是否也可通过影响血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的迁移和增殖参与AS的发病也有待阐明。为此，本研究拟检测循环内皮细胞(circulating endothelial cell，CEC)表面有无EL的表达，探讨CEC表达EL与冠心病临床危险性和冠脉危险积分的关系：同时通过细胞学实验研究EL对内皮细胞表达粘附分子的影响，EL对VEC、SMC迁移、增殖和凋亡的影响，以初步了解EL参与AS形成的机制。研究共分三部分：第一部分，在体研究，通过选择性冠脉造影术选择不同冠脉病变的患者，检测冠状窦、外周血中循环内皮细胞数量及EL表达情况，分析EL的表达与冠心病患者临床危险性、冠脉危险积分的关系以及在冠心病预后判定中的作用，从在体了解EL与AS的关系；第二部分，采用抗体抑制法探讨EL对内皮细胞表达粘附分子的影响；第三部分，细胞研究，采用脂质体质粒转染技术，将高表达EL的质粒转入人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)中，观察EL对HUVEC的迁移、增殖和凋亡的影响；采用共培养技术，观察高表达EL的HUVEC对共培养的主动脉SMC迁移和增殖的影响。主要实验方法：第一部分，对行选择性冠脉造影术的患者取冠状窦血和股静脉血，密度梯度法分离血中的CEC，通过免疫组化和Western Blot检测其EL的表达，并计算EL阳性的循环内皮细胞比例(EL~+／CECs)，分析EL~+／CECs与冠心病临床危险性的关系：急性心肌梗死组(acute myocardial infarction，AMI)、不稳定心绞痛组(unstable angina pain，UAP)、稳定心绞痛组(stable angina pain，SAP)和对照组，分析EL~+／CECs与CECs计数、LDL／HDL、高敏C反应蛋白(high sensitive C reactive protein，hsCRP)、冠脉危险积分的关系，随访观察EL~+／CECs在冠心病患者预后中的作用。第二部分，以TNF-α(10ng／ml)刺激HUVEC，观察HUVEC粘附分子基因的表达，再采用EL抗体进行干预，检测HUVEC粘附分子基因的表达情况，探讨EL在HUVEC粘附分子表达中的作用。第三部分，采用脂质体基因转染方法，建立高表达EL的HUVEC细胞株，以EL抗体预处理干预，观察高表达EL后HUVEC增殖、迁移、凋亡能力的变化；采用共培养技术，观察高表达EL的HUVEC对共培养的VSMC迁移、增殖的影响。主要研究结果：1．CEC中存在EL的表达，其表达量随临床危险性增加而增大，依次为AMI组＞UAP组＞SAP组＞对照组。2．EL~+／CECs在各组间有显著性差异，同一患者外周与冠状窦静脉血的EL~+／CECs间无显著差异，因而冠心病患者外周血的EL~+／CECs可较好的反映冠脉血管的EL~+／CECs。3．EL~+／CECs与患者血中LDL／HDL，hsCRP，CECs计数显著相关，与hsCRP相关系数最大。4．冠脉危险积分与EL~+／CECs、hsCRP、CECs计数明显相关，与EL~+／CECs相关性系数最大(r=0.853)，EL~+／CECs高的患者其预后较差。5．诱导HUVEC表达EL的TNF-α剂量可引起HUVEC粘附分子如细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)和E选择素(E-selectin)的高表达，这种作用可被EL抗体呈剂量依赖性的抑制。6．HUVEC高表达EL后，其迁移能力增加，凋亡率增加，但增殖能力减弱。7．HUVEC高表达EL后，可促进共培养的VSMC迁移和增殖。结论：1．冠心病患者VEC中存在着EL的表达，其表达量与冠心病的临床危险性正相关，EL~+／CECs可能在冠心病的预后判定中起着重要作用。2．EL可通过促进内皮细胞表达粘附分子，增加炎性细胞粘附，引起血管局部炎症反应，参与AS的发生。3．EL可通过促进VEC向病损区的迁移，并增加其凋亡率，降低其增殖能力，促进SMC向内膜迁移和增殖，参与AS的发病。