【摘 要】
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近年来DNA疫苗使用质粒DNA作为目的基因载体进入靶细胞成为研究热点。DNA疫苗可使外源基因在靶细胞中表达,诱导宿主产生体液和细胞免疫应答。但质粒DNA在靶细胞中表达效率比
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近年来DNA疫苗使用质粒DNA作为目的基因载体进入靶细胞成为研究热点。DNA疫苗可使外源基因在靶细胞中表达,诱导宿主产生体液和细胞免疫应答。但质粒DNA在靶细胞中表达效率比较低,所以如何大规模生产符合药用标准的质粒DNA成为关注的焦点。本论文对工程菌培养基的优化、发酵工艺各参数的影响、碱裂解的优化、层析纯化路线及质粒DNA质量控制进行深入的研究。(1)利用响应曲面法的Plackett-Burman法和中心组合设计对培养基进行了优化,我们确定了发酵培养基配方。(2)通过实验确定了发酵各参数对质粒DNA拷贝数影响,优化发酵工艺。(3)设计了碱裂解反应器,使碱裂解操作变成自动、连续化的过程,适用于工业化生产。(4)确定质粒DNA层析纯化路线为离子交换色谱、疏水色谱、分子排阻色谱。(5)建立与本工艺相符质量检测平台,对工艺各阶段能实施质量检测和质量控制。本工艺路线质粒DNA总回收率为46%。依据“DNA疫苗临床用药质量指导原则”进行各项检验,结果符合DNA疫苗临床用药标准。结果表明本工艺适用于工业化生产符合药用标准的质粒DNA。
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