目的:国际上现有免疫组化自动染色仪均无法实现高压修复,存在加样过程复杂,染色时间长,染色结果比手工差等问题。本工作目的是搭建新型免疫组化自动染色仪解决上述问题,保证自动染色仪免疫组化染色结果的可靠性。方法:对免疫组化染色脱蜡、修复、降温及抗原抗体结合等关键步骤进行改进,使免疫组化流程更适用于自动化仪器并提升染色效率。设计可进行高压修复的免疫组化反应器以及阵列式的加样系统。将优化后的染色流程以及设计的反应器及加样系统应用于新型免疫组化自动染色仪,并完成了新仪器的搭建和测试。结果:对免疫组化染色关键过程的优化结果如下:1.脱蜡过程:用新型脱蜡液代替二甲苯,不影响HE染色和免疫组化染色结果。新型脱蜡液无毒且不易挥发,更适于在自动化仪器中使用。2.修复过程:对于一些抗体,如ki-67、ER等,不论是手工还是优化后的自动染色仪,EDTA或柠檬酸常压修复都难以达到柠檬酸高压修复的染色效果。而推荐柠檬酸高压修复的抗体占需要热修复的商品化一抗的69.5%。因此解决这一问题的最终途径是开发可以进行高压修复的免疫组化自动染色仪。3.降温过程:换液降温与手工外壁冲淋降温相比,ki-67免疫组化染色效果一致,降温时间缩短至10min,仅为传统仪器降温时间的1/3。换液降温过程易于自动控制,更用适于自动化免疫组化染色流程。4.抗原抗体结合过程:在振荡的条件下一抗孵育时间可由60min缩短至30min,且易于在自动化条件下实现。新型自动染色仪的搭建,除了应用上述优化结果,还进行了如下改进:1.设计了能耐0.1MPa压力、能进行120℃修复的反应器,实现了高压修复。2.设计了模块化的阵列式加样系统,解决了现有单一加样头存在的需要反复清洗、加样效率低的问题,同时避免了试剂间的交叉污染。经测试,所设计的自动化染色仪实现了高压修复,简化了加样过程,染色结果与手工一致且好于市售染色仪;用时仅为手工染色的63%,比市售仪器缩短21%,染色效率大大提高。结论:本研究解决了现有染色仪在高压修复、降温、加样等方面存在的问题,提高了染色质量和效率,对推进免疫组化自动化和标准化具有重要意义。