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骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells, SMSCs)作为一种肌源性干细胞,对出生后骨骼肌的生长和肌肉受损后修复有重要作用。本试验以初生南江黄羊和波尔山羊背最长肌为材料,0.2%链酶蛋白酶消化后,采用Percoll液密度梯度离心法纯化并通过形态学和PAX-7免疫荧光染色鉴定收集到的SMSCs。通过血球计数板和CCK-8试剂盒检测比较南江黄羊和波尔山羊SMSCs 0-8 d9个阶段的增殖能力；HE染色比较3-8d的SMSCs融合率。此外,为了获得稳定的内参基因以定量目标基因的表达,利用qRT-PCR检测了9个内参基因(β-ACTIN, GAPDH, TOP2β、 YWHAZ, SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)在不同阶段(1d、3d、4d和7 d)SMSCs中表达量并运用geNorm软件筛选。我们进一步比较了SMSCs的标志基因PAX-7、MYOD、MYOG及p38MAPK信号通路中主要基因(TAK1、MKK3、MKK6、p38MAPK, MEF2A和MEF2C)在两个品种不同培养阶段SMSCs (1 d、3 d、4 d和7 d)的表达差异,以探索调控SMSCs增殖分化能力差异的分子机制。结果如下：(1)PAX-7免疫荧光染色山羊的SMSCs呈阳性,且阳性率在95%以上,建立了体外获取高纯度山羊SMSCs的分离和纯化方法。(2)在相同条件下培养山羊的SMSCs发现第3 d、4 d和5 d时南江黄羊SMSCs的数目都显著地高于波尔山羊(P<0.05),且南江黄羊SMSCs更早进入指数生长期,CCK-8检测结果也发现第3d、4d和5 d南江黄羊SMSCs的OD值显著高于波尔山羊(P<0.01),说明南江黄羊比波尔山羊SMSCs具有更强的增殖能力。(3)融合指数的检测发现南江黄羊和波尔山羊SMSCs都在第4d时进入快速融合阶段,第8 d时融合率达80%左右,总体上南江黄羊SMSCs的融合率高于波尔山羊,且在第6 d具有显著性(P<0.05),暗示南江黄羊SMSCs的融合率高于波尔山羊。(4)9个内参基因在不同时期SMSCs中表达稳定度的由高到低的排序是：PGK1、 SDHA、β-ACTIN、RPL4, GAPDH、TOP2β、YWHAZ, RP2、HPRT,在不同生长阶段的SMSCs中表达最稳定的内参基因是PGK1；配对变异系数分析显示至少需要3个内参基因(PGK1、SDHA和β-ACTIN)校正定量表达数据才能获得可靠的结果。(5) qRT-PCR检测PAX-7, MYOD和MYOGmRNA在SMSCs中的表达量,发现PAX-7在SMSCs的增殖期高表达,进入分化期后表达下降,且在增殖第1d和3d的南江黄羊SMSCs中的表达量都显著高于在波尔山羊(P< 0.05); MYOD在增殖和分化期的表达量都较高,且增殖期第3 d和分化期第1 d南江黄羊SMSCs的表达量均极显著地高于波尔山羊(P< 0.01); MYOG在SMSCs的增殖期几乎不表达,进入分化期后大量表达,最高表达量出现在分化期的第1 d。这些结果说明PAX-7和MYOG分别主要与促进SMSCs的增殖和分化有关,而MYOD对SMSCs的增殖和分化都有促进作用。(6)在p38MAPK信号通路中,TAK1和MKK6在两个品种山羊SMSCs各时期的表达量都很低,而MKK3、p38MAPK、MEF2A和MEF2C的表达量相对较高,且在进入分化期后的表达上升,暗示后四种基因对SMSCs的分化具有调控作用。试验还发现MKK3在分化期第4 d,p38MAPK在分化第1 d,MEF2C在分化期第1 d和第4 d的南江黄羊SMSCs中的表达量都显著(P<0.05)高于在波尔山羊SMSCs中的表达,另MEF2A在两山羊品种间虽无显著差异但表达量都较高,且在进入分化期后表达上调,因南江黄羊中SMSCs的融合率高于波尔山羊,表明MKK3、p38MAPK、MEF2A和MEF2C对山羊SMSCs的分化具有促进作用。