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目的:创新制备一种具有肿瘤靶向、携带siRNA、同时产生光热效应三重功效的新型金纳米棒(Gold nanorod,GNR)纳米靶向系统FA-GNA-siRNA。探究该系统介导的RNAi技术靶向沉默小鼠黑色素瘤细胞(B16-BL6)中BRAF基因以及对肿瘤细胞生物学功能的影响,研究联合光热治疗法(Photothermal therapy,PTT)对小鼠黑色素瘤细胞凋亡的影响,以及探讨FA-GNA-siRNA介导的RNAi技术联合PTT对小鼠黑色素瘤的治疗效果。方法:1.GNR-FA采用种子合成法制备金纳米棒并进一步功能化修饰。透射电子显微镜(TEM)、紫外-可见光谱、核磁共振氢谱观察其大小和分散度、共振吸收峰、功能化修饰后的表面分子结构。2.MTT法检测修饰前后GNR对细胞的毒性。3.凝胶阻滞实验观察GNR-FA对siRNA装载效果。4.细胞流式技术检测FA-GNR-siRNA对B16-BL6细胞的转染效率。5.qPCR及Western Blot观察B16-BL6细胞/荷瘤小鼠BRAF基因/蛋白的沉默率及MEK-ERK信号通路相关蛋白表达量。6.划痕实验/Transwell迁移、MTT法、流式细胞术分别观察BRAF沉默迁移、增殖能力的变化。7.温度计监控GNR的光热效应;MTT法、流式细胞术检测GNR对细胞的光热效应、金纳米棒介导的RNAi技术联合PTT对B16-BL6细胞凋亡的影响。8.建立C57BL/6 B16-BL6荷瘤小鼠模型,采用透皮给药进行治疗,观察对肿瘤生长的影响。结果:1.GNR修饰后紫外吸收峰由发生明显的红移,透射电镜显示尺寸并未发生明显的变化,核磁共振氢谱进一步说明FA连接GNR成功。2.MTT法显示修饰后的FA-GNR毒性明显下降。3.凝胶阻滞显示GNR-FA与siRNA的质量比为3.5:1时为最适装载比例,可最大程度携带siRNA。4.流式细胞术结果显示GNR-FA对siRNA的转染效率明显高于GNR-PEI,并随浓度增加而增加,与荧光显微镜下观察一致,其转染效率受血清的影响较小。5.qPCR、Western blot结果显示体外BRAF在基因和蛋白水平沉默率均达到了80%以上。6.基因沉默BRAF后,黑色素肿瘤细胞增殖能力及迁移能力均明显下降,MEK-ERK信号通路P-MEK、P-ERK蛋白下调明显。7.在光密度4w/cm~2,激光照射5min的PTT效果明显,流式细胞术检测RNAi联合PTT明显促进B16-BL6细胞的凋亡。8.体内联合治疗组较其他对照组和治疗组明显抑制肿瘤生长速度、减小肿瘤体积、减轻肿瘤重量。结论:1.GNR-FA能够安全有效靶向导入siRNA并沉默B16-BL6细胞中的BRAF基因,改变其生物学特性,抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞的凋亡。2.GNR-FA介导的RNAi联合PTT可有效抑制B16-BL6黑色素肿瘤细胞在荷瘤小鼠的生长。