采后番茄寄生菌的分离、鉴定及E-2-己烯醛的抑菌机理研究

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本研究从采后腐烂番茄表面分离、纯化获得番茄的寄生菌,并对其进行分子生物学鉴定和生理生化特性的研究。利用GC-MS技术分析番茄不同时期叶片中挥发性物质的主要成分,并测定了番茄叶片挥发性物质合成途径的关键性酶脂肪氧合酶(LOX),苯丙氨酸转氨酶(PAL)的酶活。GC-MS分析得知,挥发性物质中的主要成分中有E-2-己烯醛,利用其对番茄寄生菌进行抑菌研究,并通过一系列实验探讨可能的抑菌机理。最后,研究E-2-己烯醛对储存期番茄感染病菌的抑制情况及番茄品质的影响。具体的结果总结如下:(1)番茄寄生菌圆弧青霉(Penicillium cyclopium)的鉴定及生理生化特性研究从成熟腐烂的番茄表面分离、纯化获得一株寄生菌:圆弧青霉。利用扫描电镜对其进行形态特征观察、生理生化特性分析。最后,提取其r DNA,根据保守序列ITS设计引物并进行PCR扩增,所得产物送上海生工测序,序列经NCBI序列比对分析,得知其为圆弧青霉。选用其作为研究材料,根据生理生化特性分析,得知其最适生长温度为25℃,pH值为5时,菌落长势旺盛,孢子的致死温度为70℃。(2)番茄不同时期叶片的挥发性成分分析及其合成途径关键性酶的酶活测定通过顶空固相微萃取法收集品种―A57‖番茄营养生长期的叶片挥发性物质,并通过GC和GC-MS技术对其挥发性物质组分进行分析。结果表明,番茄叶片中主要挥发性成分以醛类物质含量为最多,达到47.41%,烯萜类物质含量也很高,所占比例为46.51%,其它物质含量都很少,包括烷烃类,酮类,醇类等。同时分别采集二叶期,十叶期,开花期的―A57‖,―克莱斯顿‖,―中蔬5号‖番茄品种的叶片,测定其影响挥发性物质的关键性酶LOX,PAL的酶活性。(3)E-2-己烯醛对圆弧青霉的抑菌作用研究经GC-MS技术分析,发现E-2-己烯醛是所有挥发性物质中含量最高的成分之一。初步抑菌实验结果显示,E-2-己烯醛具有明显的抑菌效果,E-2-己烯醛的MIC(最低抑菌浓度)为160μl/L,MFC(最低杀菌浓度)为320μl/L。经扫描电镜观察,发现的菌丝及分子孢子的形态发生了很大改变。核酸泄漏的结果显示,在MFC浓度时,细胞内溶物大量释放,而对照组的OD值几乎未发生变化。E-2-己烯醛处理后的真菌培养液电导率和pH值测定结果显示,MIC浓度时,电导率从开始的85.3μs/cm到120min的115.1μs/cm,MFC浓度处理的菌液电导率由开始的99.1μs/cm增至128.4μs/cm,120min时,浓度为MIC,MFC的E-2-己烯醛处理的pH分别为6.74和6.41,明显的低于对照组(7.13)。经原子吸收分光光度计测定,K+离子的含量随处理时间的延长而呈现出明显的上升趋势。120min时对照组的钾离子浓度为2.40mg/L,MIC浓度下,钾离子的浓度为2.56mg/L,当浓度为MFC时,测得的钾离子的浓度为2.76mg/L。实验表明,经E-2-己烯醛120min处理,对脂质含量进行测定,MIC浓度下,与对照组相比,减幅为26.9mg/g,而MFC浓度下,同一时间段,其减幅达43.8mg/g。(4)E-2-己烯醛对番茄实体抑菌的影响选取大小均一,无损伤,品种为―中苏5号‖的番茄进行实验,研究E-2-己烯醛对圆弧青霉感染的抑制效果,5d后统计番茄果实的感染率情况。从整体上讲,E-2-己烯醛的抑菌效果随抑菌浓度的升高越明显,当其浓度为1280μl/L时,明显的抑制了番茄的发病率。E-2-己烯醛对番茄品质的影响的实验结果表明,在储存期320μl/L的E-2-己烯醛处理后可溶性固形物(TSS)、可滴定酸(TA)的下降速度和对照组相比,有所变缓,处理第5天时,TSS的含量差异较大,9d后,对照组,实验组分别为3.2%,3.1%,变化幅度不大。而TA含量在贮藏第9天时,对照组番茄由最初0.517%下降至0.382%,320μg/m L E-2-己烯醛处理后番茄中TA下降至0.392%(P<0.05)。可溶性糖的含量在处理组中也增加的较慢,在储存的第9d测定显示320μl/L的E-2-己烯醛处理后可溶性糖含量为4.01%,而对照组为4.25%。
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