论文部分内容阅读
目的建立SD大鼠部分去背根((L3-L4,L6背根节切除,L5备用))神经可塑性模型,进行电针刺治疗并用降钙素相关基因肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)标记脊髓II板层神经膨体,研究细胞色素氧化酶5A (cytochrome c oxidase5A, COX5A)在脊髓神经可塑性和针刺中的作用,为阐明COX5A在针刺促进脊髓神经可塑性中的作用提供实验依据。方法将健康成年的Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成:正常组、手术组、部分去背根电针刺坐骨神经注射空载体组,部分去背根电针刺坐骨神经注射COX5A干扰组、每组5只大鼠。手术组仅去除大鼠双侧L3、L4和L6背根节,保留双侧的L5背根节,干扰组和空载组在去除大鼠双侧L3、L4和L6背根节的基础上,进行坐骨神经逆行注射含有COX5A干扰基因片段的HIV慢病毒表达载体。正常组及各处理组常规给予饮水、饲料并及时更换垫料,保暖等护理。将各组大鼠分别于7天、14天、28天,进行压爪和甩尾痛温觉检测,28天取材,用免疫荧光组织化学进行L5脊髓II板层神经膨体CGRP标记染色,计量II板层CGRP阳性神经膨体数量变化。用SPSS软件进行分析。结果1.COX5A干扰表达载体构建成功,构建结果和NCBI上的序列一致。将构建出的病毒载体成功包装出伪病毒颗粒,能成功转染PC12细胞。2.不同时间点压爪反射测试结果显示,部分去背根手术组和正常组比较,大鼠压爪刺激时间延长(P<0.05),而去背根并电针刺治疗cox5a干扰后压爪刺激时间又显著延长,与电针刺空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05)。说明COX5A干扰影响感觉功能恢复。3.甩尾反射不同时间点测试结果显示,各组之间均无统计学意义,仅有趋势上的变化。4.脊髓II板层CGRP阳性膨体数计量分析据显示,部分去背根后28天组和正常组比较,手术组II板层CGRP阳性膨体数显著减少(P<0.05)。但电针刺后II板层CGRP阳性膨体数较手术组明显增加(P<0.05)。而电针刺组给予cox5a干扰后,II板层CGRP数量较电针刺空载组进一步明显减少(P<0.05)。结论通过成功构建了COX5A干扰慢病毒载体。研究了COX5A在部分去背根的SD大鼠脊髓神经部分去传入后的作用。阐明COX5A与脊髓神经可塑性和针刺作用相关,从而为今后将COX5A用于神经疾病治疗和阐明针刺促进脊髓可塑性的机制奠定基础。