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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)感染引起的一种以感染猪发热、厌食、母猪繁殖障碍、仔猪出现严重的呼吸障碍等症状的急性传染性疾病。最早于1987年在美国发现该病。自2006年以来,高致病性PRRS (HP-PRRS)在我国广泛流行,其主要特征为高热、高发病率以及高死亡率,给我国养猪业带来严重的经济损失。PRRSV属于动脉炎病毒科,动脉炎病毒属,为单正链(+)RNA套式病毒。目前认为该病毒能够引起机体严重的免疫抑制,是引起猪免疫紊乱的重要病原之一。其是宿主相互作用的机制还未清晰,尤其是对PRRS病毒(PRRSV)的感染对仔猪骨髓的损伤机制的研究较少。因此该论文选择宿主骨髓作为研究对象,对于深入探讨PRRSV对宿主中枢免疫器官的影响具有重要的科学意义。本实验室发现高致病性PRRSV (Highly pathogenic, HP-PRRSV) HuN4株感染断奶仔猪后呈现严重的临床症状。本实验目的是进一步探究HP-PRRSV HuN4株对断奶仔猪骨髓损伤的情况,以及骨髓内淋巴细胞亚群和外周血中淋巴细胞亚群的变化。对骨髓的损伤情况通过以下几方面进行评价：骨髓内病毒的感染情况,细胞凋亡情况,以及骨髓细胞感染病毒的类型,凋亡细胞类型以及凋亡与感染的共定位。实验结果发现HP-PRRSV HuN4株能感染仔猪骨髓细胞,在病毒感染后3d仔猪骨髓内病毒载量为1063±08copies/107events,在感染后7d病毒载量呈上升趋势,病毒载量达到107.5±1.1copies/107events,感染后10d病毒载量略有下降,病毒载量达呈106.1±0.4copies/107events。而HP-PRRSV HuN4F112感染组中,仔猪感染后期病毒载量一直存在较低水平,感染后7d病毒载量偏高,仅为103.2±0.4copies/107events。通过流式检测骨髓内凋亡细胞发现：在HP-PRRSV HuN4感染组,仔猪感染3d后骨髓细胞内凋亡细胞开始升高26.9±3.9%,感染后7d和10d凋亡细胞的数量显著增加,其分别为40.1±4.7%,45.7±5.9%,在HP-PRRSV HuN4F112感染组中则发现骨髓内凋亡细胞略微升高。仔猪感染3d后骨髓细胞内凋亡细胞开始升高26.8±5.9%,感染后7d和10d凋亡细胞的数量呈略微升高趋势,其分别为26.9±2.5%,27.7±2.9%,这些都显著高于对照组(p<0.05)。通过TUNEL法检测骨髓内细胞凋亡得到了进一步的验证,HP-PRRSV HuN4, HuN4F112均能引起骨髓内细胞的凋亡。此外,仔猪感染HP-PRRSV后骨髓出现较为严重的损伤,其中包括前体细胞和粒细胞在机体感染病毒后发生显著的细胞凋亡现象,并且在病毒感染后第7d和10d细胞凋亡率呈上升趋势。通过激光共聚焦进行扫描发现,SWC3+SWC8+/-细胞能感染病毒。此外骨髓内有大量的SWC3+SWC8+发生细胞凋亡。在凋亡与感染细胞类型鉴定中实验发现PRRSV感染的靶细胞发生凋亡,感染后期出现大量未感染病毒的骨髓前体细胞和粒细胞发生旁路凋亡,即除了感染的细胞发生凋亡,大量的未感染细胞也发生细胞凋亡。在实验过程中,骨髓内的CD3+细胞比例上调,显著高于对照组,通过流式检测发现HP-PRRSV HuN4株感染仔猪骨髓内CD4-CD8+以及CD4+CD8+细胞比例显著升高(p<0.05),CD4+CD8以及CD4-CD8细胞比例显著减少(p<0.05)；同时研究发现外周血中的CD3+细胞数降低,出现瞬时减少现象,其进一步检测CD4CD8的细胞比例,发现这些细胞的比例与骨髓内的细胞呈相似趋势：此外,PRRSV HuN4F112感染组仔猪骨髓内T淋巴细胞的比例发生类似的变化。此外,血液中CD4-CD8+细胞比例显著增加(p<0.05),而CD4+CD8细胞比例仅在感染后7d显著减少(p<0.05)。