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背景:目前用于肺癌诊断的标志物为数不多,肺癌的早期诊断比较困难,80%的患者在确诊时已属中晚期。鉴于肿瘤的发生过程中,新蛋白的出现或原有蛋白的异常、过度表达,会引起机体免疫应答反应,产生的肿瘤自身抗体,在临床上无法发现的早期肺癌即可出现,这些肿瘤自身抗体不仅能成为更为可靠的血清肿瘤标志物,还为筛选肿瘤相关抗原提供了有效途径。SEREX(Serological analysis of recombinant expression libraries)是近年来发展起来的一种利用自身抗体鉴定、分离肿瘤相关抗原的方法,通过与噬菌体展示技术结合,筛选肿瘤相关抗原的效率大大提高。目的:为了寻找更多的非小细胞肺鳞癌早期诊断和靶向治疗相关的标志物,但基于大多数肿瘤微观不均匀性,某一基因变异、染色体畸变或者蛋白改变并不会在一种肿瘤的所有显型里,本研究选择肺癌中最常见的类型——非小细胞肺鳞癌进行肿瘤相关抗原的筛选,通过构建人源非小细胞肺鳞癌T7噬菌体展示cDNA文库,进一步利用血清自身抗体筛选和初步鉴定肺鳞癌相关抗原。方法:诊断明确的肺鳞癌患者手术标本5例,Trizol试剂提取总RNA,Straight A’s系统分离肺鳞癌mRNA,逆转录合成双链cDNA后,与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到人源非小细胞肺鳞癌T7噬菌体展示cDNA文库。进一步使用非小细胞肺鳞癌患者血清对此文库进行生物淘选和SEREX筛选,PCR扩增阳性克隆插入片段后测序分析,结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较,分析其生物学特性。选取部分克隆,初步尝试噬菌体蛋白微阵列进行单一血清验证。结果:成功构建人源非小细胞肺鳞癌T7噬菌体展示cDNA文库,原始文库重组克隆数为1.8×106 pfu,扩增后滴度为3.2×1010 pfu/ml。随机抽取24个克隆PCR扩增插入片段,电泳结果显示肺鳞癌文库插入率超过95%(23/24)。文库插入片段大小在300-1500 bp之间。初步筛选得到50个阳性克隆,测序后发现其代表15个基因,其中12个与已知cDNA序列同源,与肺癌或其他肿瘤的发生、发展关系密切;另外3个未发现有同源基因,可能是新基因。结论:本研究成功构建了人源非小细胞肺鳞癌T7噬菌体展示cDNA文库,应用SEREX技术初步发现12个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因,并经过初步验证,为进一步的深入研究打下良好的基础。