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口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的一种急性、烈性、高度接触性传染病。灭活疫苗是用于预防FMD的主要疫苗，但是其存在灭活不彻底、病毒泄露、保质期短以及某些毒株不能在细胞中大量繁殖等缺点。为了克服这些缺陷，合成肽疫苗等新型FMD疫苗的研究逐渐受到人们的重视。FMD合成肽疫苗不存在病毒基因与宿主基因重组或整合的风险，因而它比常规疫苗和基因重组疫苗更加安全。采用不同血清型FMDV毒株的抗原表位进行合成肽设计,可以解决FMD常规疫苗在不同血清型间缺乏交叉性免疫保护的问题。本研究旨在探索、研制A型FMDVAF72株合成肽疫苗，以期为FMD的防控提供新的策略，已经取得如下成果。1、将FMDV AF72分别在豚鼠和BHK-21细胞上连续传代培养，获取毒力稳定的豚鼠毒株和细胞毒株，测定豚鼠毒株的ID50以及细胞毒株的TCID50。测定AF72豚鼠毒株的全基因组序列，并对AF72结构蛋白VP1、VP4和非结构蛋白3ABC的氨基酸序列进行同源性分析。结果：1)AF72细胞毒株的TCID50以及豚鼠毒株的ID5.9250分别为：10-6.91和10-(Karber法)。2)本研究首次测定了FMDV AF72株的全基因组序列，除去poly(C)片段，基因组全长约为8206nt。3)AF72与其他A型毒株的VP1氨基酸序列同源性为79.8%－89.2%，与Asia I、C、O型毒株的VP1氨基酸序列同源性为61.6%－69.9%；AF72与其他A型毒株以及Asia I、C、O型毒株的VP4氨基酸序列同源性为94.1%－98.8%，AF72与其他A型毒株以及Asia I、C、O型毒株的3ABC氨基酸序列同源性为90.2%－98.2%。2、根据FMDV抗原表位免疫效果的研究报道，选出免疫效果显著的表位，并对这些表位进行生物信息学分析。以FMDVAF72株VP1[131－159aa]、VP4[20－35aa]、3A[21－35aa]、3B[29－42aa]四个抗原表位设计并合成了合成肽A和合成肽B：A以两个赖氨酸(KK)为连接子按并联的方式进行连接；B以两个甘氨酸(GG)为连接子按线性串联的方式连接。分析显示：VP1[131－159aa]和3B[29－42aa]含有B细胞表位的可能性较大，VP1[131－159aa]、VP4[20－35aa]、3A[21－35aa]可能含有较多的CTL表位以及Th细胞表位。3、以206为佐剂将上述合成肽制备成疫苗，进行豚鼠免疫效力评估试验。体液免疫检测：对FMDV特异性的IgG、IL-4以及血清中和抗体水平进行测量，并对IgG亚群进行了分群。细胞免疫检测：对IL-2、IL-12、IFN-γ水平进行了测量，同时，检测了淋巴细胞增殖能力以及外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞水平。体液免疫和细胞免疫检测结果表明：本研究设计的合成肽具有较好的免疫效果。合成肽A的免疫效果比合成肽B的效果好。合成肽A的最佳免疫剂量为2.5μg/200μL/只。