论文部分内容阅读
第一部分 GLP-1受体激动剂通过NOS途径促进棕色脂肪细胞功能增加 目的:研究GLP-1受体在小鼠各组织器官中的表达情况,并明确GLP-1受体激动剂对小鼠脂肪细胞功能基因表达和分化的作用,探讨其可能的相关机制。 方法:使用免疫组化及Western Blot检测小鼠各组织器官中GLP-1R的表达情况。体外培养小鼠原代棕色、白色脂肪细胞,并鉴定。诱导分化前分别加入GLP-1、L-NAME(NOS抑制剂)干预5天。细胞培养7天后对细胞进行形态学观察研究,应用荧光定量PCR、WesternBlot检测解耦连蛋白1(UCP1)、细胞死亡介导DNA碎片因子样受体α(Cidea)、过氧化物酶增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1-α)、PR包含域16区(PRDM16)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、miRNA133a、miRNA196a、miRNA133b、miRNA155的表达,采用单因素方差分析进行多组间均数比较。 结果:免疫组化提示GLP-1R在小鼠胰腺、肝脏、肾脏、胃、心脏、骨骼肌、白色脂肪、棕色脂肪、肺脏、小肠中有表达,而在脾脏中表达为阴性。形态学研究发现GLP-1组细胞内脂滴数目较对照组明显增加。与对照组相比,GLP-1组棕色脂肪特异性基因(UCP1、CideaPGC1-α)、分化基因(PRDM16、PPAR-γ)、NOS途径基因(eNOS、iNOS)的mRNA水平升高(P<0.05),UCP1、NOS蛋白水平升高(P<0.05)。使用NOS抑制剂干预后,相关基因及蛋白水平下调。在棕色脂肪细胞中,与对照组相比,GLP-1组的微小RNA-155基因水平下降(P<0.05)。 结论:GLP-1受体激动剂能上调棕色脂肪细胞功能基因的表达,促进棕色脂肪前体细胞向成熟的棕色脂肪细胞分化,增强棕色脂肪组织的功能,该作用部分通过NOS途径,且高浓度的GLP-1作用更明显。 第二部分GLP-1受体激动剂通过STAT3途径促进棕色脂肪细胞功能增加 目的:明确GLP-1受体激动剂对小鼠脂肪细胞功能基因表达和分化的作用,探讨其可能的相关机制。 方法:体外培养小鼠原代棕色、白色脂肪细胞。诱导分化前分别加入GLP-1、S31-201(STAT3抑制剂)、exendin9-39(GLP-1受体拮抗剂)干预5天。细胞培养7天后对细胞进行形态学观察研究,应用荧光定量PCR、Western Blot检测解耦连蛋白1(UCP1)、细胞死亡介导DNA碎片因子样受体α(Cidea)、过氧化物酶增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1-α)、PR包含域16区(PRDM16)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)的表达,采用单因素方差分析进行多组间均数比较。 结果:形态学研究发现GLP-1组细胞内脂滴数目较对照组明显增加。与对照组相比,GLP-1组棕色脂肪特异性基因(UCP1、Cidea、PGC1-Ⅱ)、分化基因(PRDM16、PPAR-γ)、STAT3途径基因(STAT3)的mRNA水平升高(P<0.05),UCP1、STAT3蛋白水平升高(P<0.05)。使用S31-201、exendin9-39抑制STAT3及GLP-1R后,相关基因及蛋白水平下降。 结论:GLP-1受体激动剂能上调棕色脂肪细胞功能基因的表达,促进棕色脂肪前体细胞向成熟的棕色脂肪细胞分化,增强棕色脂肪组织的功能,该作用部分通过STAT3途径。