两型骨骼肌纤维在体外培养过程中的相互转换

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目的:通过在不同糖浓度条件下体外培养快肌纤维和慢肌纤维,观察其MHC同功型表达情况,以探讨快、慢肌纤维相互转化的现象及其特征。方法:1取兔副半膜肌背侧亚部,(快肌,Ⅱ型肌纤维)和固有半膜肌亚部(慢肌,Ⅰ型肌纤维)通过ATP酶染色法,进行肌纤维类型鉴定。2取兔副半膜肌背侧亚部,和固有半膜肌亚部获取组织和细胞,按以下分组进行实验。(1)组织组分别获取两个亚部的肌组织备用。(2)消化组分别从两个亚部获取两型肌细胞备用。(3)高糖培养组是将两型肌细胞用高糖培养基进行培养。(4)低糖培养组是将两型肌细胞用低糖培养基进行培养。所有培养的两型肌细胞分别在1、3、7天取材,并与组织组和消化细胞组一起检测MHC同功型的表达情况。结果:1)ATP酶染色显示家兔副半膜肌背侧亚部着色较深,固有半膜肌亚部着色较浅。未见深浅着色相间排列的现象。2)组织组MHC同功型检测结果显示Ⅰ型肌纤维表达MHCⅠ,Ⅱ型肌纤维表达MHCⅡa,Ⅱb及Ⅱx。3)消化组MHC同功型检测结果显示Ⅰ型肌纤维表达MHCⅠ,Ⅱ型肌纤维表达MHCⅡa,Ⅱb及Ⅱx。4)Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞高糖培养组:Ⅰ型细胞在高糖培养时第1天以表达MHCⅠ为主,同时也表达少量的MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx。第3天时仍表达MHCⅠ,但其表达量较第1天减少,具有显著性差异,MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx表达量与第1天比较明显增加,有显著性差异。第7天时MHCⅠ表达量与第3天比较进一步减少,具有显著性差异,MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx表达量与第3天比较无明显变化。Ⅱ型细胞在高糖培养时第1天只表达MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx,不表达MHCⅠ;第3天和第7天仍只表达MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx,不表达MHCⅠ与第1天比较无明显差异。5)Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞低糖培养组:Ⅰ型细胞在低糖培养时第1天以表达MHCⅠ为主,同时也表达少量的MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx。第3天时仍表达MHCⅠ,其表达量与第1天无显著性差异,同时MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx表达量增加,与第1天比较有显著性差异。第7天时MHCⅠ表达量与第3天同样无显著性差异,MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx表达量与第3天比较无显著性差异,但与第1天比较仍存在着显著性差异。Ⅱ型细胞在低糖培养时第1天只表达MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx,不表达MHCⅠ。第3天仍表达MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx,其中Ⅱa和Ⅱb表达量增加,Ⅱx的表达量减少,Ⅱb和Ⅱx的表达量与第1天比较有显著性差异,同时开始表达少量的MHCⅠ。第7天MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx的表达变化与第3天类似但无显著性差异,MHCⅠ的表达量与第3天比较有所增加且与第3天存在有显著性差异。结论:两型骨骼肌纤维在体外分离过程中没有相互转化的现象,但在体外培养过程中无论是在高糖培养还是低糖培养条件下,Ⅰ型细胞都会在第1天开始向Ⅱ型细胞转化,此后MHCⅡa,MHCⅡb,MHCⅡx的表达量逐渐增加。在低糖培养条件下,Ⅱ型细胞仍具有其Ⅱ型细胞细胞的特性,在第3天时开始表达MHCⅠ。
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