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“四时五脏”理论作为中医学理论体系中的重要组成部分,体现了中医固有的“天人相应”的思维模式。这种思维模式认为人体内五脏的生理、病理变化受到自然界四时气候变化的影响。“肝应春”理论作为“四时五脏”理论的组成部分之一,认为春季人体肝的生理功能与春季自然界气候变化之间同步相应,春季五行属木,肝木具有生发、疏通条达的作用,而肝旺于春季。因此“肝应春”主要体现在其生发、疏泄之力增强。通过对“肝应春”理论进行相关实验研究,以期进一步深化对中医肝藏象实质的认识。1目的本课题拟从纯生理以及病理反证的角度研究季节变化对肝主疏泄功能影响,为进一步研究“肝应春”理论的微观机制,丰富“四时五脏”理论提供一定的实验依据。2；方-法2.1实验动物健康雄性SD大鼠108只,清洁级,体质量170-190g,分别于2013年春分、夏至、秋分、冬至前7d购入,适应性喂养7d后将雄性SD大鼠称重,随机分为正常组、慢性不可预见性轻度应激(CUMS)组和束缚应激组(CRS),每组9只,正常组自然光照、室温饲养,CUMS组和束缚应激组分别进行21d的造模刺激,造模后对3组大鼠进行称重,处死取材。2.2检测方法大鼠海马中中枢神经递质5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)含量测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)2.3统计分析采用spss17.0统计软件进行数据的分析。组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),以P<0.05表示差异具有统计学意义,P<0.01表示差异具有显著统计学意义。数据的结果采用均数±标准差((?)±s)表示。3结果3.1季节变化对海马中5-HT含量的影响(1)三组动物海马中5-HT含量的变化均呈现秋季>冬季>春季>夏季的趋势。正常组、束缚应激组海马中5-HT含量夏季与其它三季比较差异均有显著统计学意义(P<0.01),秋季与其它三季比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)；CUMS组海马中5-HT含量春季与其它三季比较差异均有显著统计学意义(P<0.01),夏季组与其它三季比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。(2)与同一季节的正常组比较,CUMS组春、夏、秋季呈现下降趋势,冬季呈现上升趋势；与同一季节的正常组比较束缚应激组四季都是呈现下降趋势；与同一季节的CUMS组比较束缚应激组春、秋季呈现上升趋势,夏、冬季呈现下降趋势。(3)组间比较：春季CUMS组、束缚应激组与同一季节的正常组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01),均呈现下降趋势；秋季CUMS组与同一季节的正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),呈现下降趋势。3.2季节变化对海马中DA含量的影响(1)正常组、束缚应激组海马中DA含量的变化均呈现春季>冬季>秋季>夏季的趋势,CUMS组海马中DA含量的变化呈现春季>夏季>冬季>秋季的趋势；正常组春季与其它三季差异具有显著统计学意义(P<0.01),冬季与夏秋季节比较差异具有统计学意义(P<0.05)；CUMS组春季与秋季比较差异具有显著统计学意义(P<0.01)；束缚应激组春季与夏、秋、冬季比较差异有显著统计学意义(P<0.01),束缚应激组夏季与春、冬季比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。(2)与同一季节的正常组比较CUMS组春、秋、冬季呈现下降趋势,夏季呈现上升趋势；与同一季节的正常组比较束缚应激组春夏冬季呈现下降趋势,秋季呈现上升趋势；与同一季节的CUMS组比较束缚应激组春秋冬季呈上升趋势,夏季呈现下降趋势。(3)组间比较：与同一季节的正常组比较春季CUMS组、束缚应激组有显著性统计学差异(P<0.01),冬季CUMS组与同一季节的正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),夏季CUMS组与夏季束缚应激组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.3季节变化对海马中NE含量的影响(1)正常组海马中NE含量的变化呈现秋季>春季>冬季>夏季的趋势,CUMS组、束缚应激组海马中NE含量的变化均呈现秋季>冬季>春季>夏季的趋势,正常组夏季与秋季比较差异有显著统计学意义(P<0.01),与春季比较差异有统计学意义(P<0.05)；CUMS组秋季与冬季比较差异有显著统计学意义(P<0.01)；束缚应激组春季与夏、秋季比较差异具有显著统计学意义(P<0.01),与冬季组比较差异具有统计学意义(P<0.05),束缚应激组秋季与春、夏、冬季比较差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(2)与同一季节的正常组比较CUMS组春、冬季呈现下降趋势,夏、秋季呈现上升趋势。与同一季节的正常组比较束缚应激组春季与冬季呈现下降趋势,夏季与秋季呈现上升趋势,束缚应激组与同一季节的CUMS比较均呈现下降趋势。(3)组间比较：春季束缚应激组与同一季节正常组比较差异具有显著统计学意义(P<0.01),夏季束缚应激组,冬季束缚应激组与同一季节的正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。4结论(1)季节变化会在一定程度上影响到正常组与模型组动物海马中5-HT、DA、NE的含量。三组动物5-HT含量春季与夏秋两季比较差异具有统计学意义,且呈现出低于秋季,高于夏季的趋势,与冬季组比较差异不明显；三组动物DA含量春季最高,且正常组、束缚应激组与其它三季比较差异具有统计学意义,CUMS组春季与秋季比较其差异有统计学意义；三组动物NE含量表现出的规律不一致,但呈现出春季高于夏季,低于秋季与冬季差异不明显的趋势。(2)中医肝应春的理论内涵与海马中单胺类神经递质之间存在相关性,春季各组5-HT、NE含量呈现出高于夏季,低于秋季,与冬季比较变化不明显的趋势,而春季各组DA含量均显著高于其它三季。提示中医学“肝应春”理论存在着多种神经递质参与的复杂机制。(3)CUMS模型与束缚应激模型,这两种造模方式并未受到季节变化的显著影响,是相对稳定的情志疾病造模方式。