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目的:本项目中,我们拟探索lncRNA AK085865在小鼠过敏性哮喘模型中对气道炎症、气道重塑和气道高反应性的影响,进一步深入探讨AK085865在体内环境中调控巨噬细胞极化对过敏性哮喘小鼠的影响,旨在阐明AK085865在过敏性哮喘小鼠模型中的作用及其细胞免疫学机制,从而为过敏性哮喘的发病机制研究和生物学防治提供新的理论基础和实验依据。方法:(1)分组:6-8周龄的雌性野生型C57BL/6小鼠随机分成PBS组,WT-Df1组,6-8周龄的雌性基因敲除小鼠则分为KO-Df1组;(2)造模:WT-Df1组与KO-Df1组采用尘螨蛋白(Dermatophagoidesfarinae1,Df1)联合雾化攻击的方法诱导C57BL/6小鼠建立过敏性哮喘模型,而PBS组则给予PBS致敏及雾化;(3)检测:采用荧光定量PCR检测哮喘小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞及肺组织中lncRNA AK085865表达水平;通过HE及PAS染色观察各组小鼠组织病理学变化,比较各组小鼠气管周围炎症细胞浸润水平和气道重塑水平;通过小鼠肺功能仪,观察各组小鼠的气道高反应性;通过流式细胞术检测气道组织中相关炎性细胞数目;通过ELISA检测BALF上清液及肺组织匀浆中炎症细胞因子的表达;采用流式细胞术检测BALF和肺组织M1/M2巨噬细胞比例变化;qPCR检测BALF细胞和肺组织M1/M2巨噬细胞相关标志物;采用流式细胞术检测BALF和肺组织中固有淋巴细胞群体的比例和数量的改变;过继回输巨噬细胞于小鼠体内观察上述指标的变化。结果:(1)本实验利用Df1致敏雾化构建哮喘模型,通过对PBS组和WT-Df1组的肺组织病理学的检测,符合哮喘模型的特征,提示造模成功;(2)与PBS组相比,WT-Df1组lncRNA AK085865的表达水平在BALF细胞以及肺组织中均有表达,但在BALF细胞中表达水平更高;(3)与WT-Df1小鼠相比,KO-Df1组小鼠支气管周围炎症反应以及杯状细胞增生与粘液分泌减少,气道高反应性降低,并伴随着BALF以及肺组织中炎性细胞数量及炎症细胞因子表达水平下降;(4)使用流式细胞术及qPCR检测发现,lncRNAAK085865敲除明显减少小鼠过敏性气道炎症模型中M2巨噬细胞比例;(5)通过回输WT小鼠骨髓来源的M0巨噬细胞至KO-Df1小鼠,发现巨噬细胞中lncRNA AK085865缺失是诱导哮喘敏感性降低的主要原因;(6)使用流式细胞术检测发现,与WT-Df1小鼠相比,KO-Df1组小鼠BALF及肺组织中ILC2s细胞比例下降,BALF中ILC2s细胞分泌的Th2型细胞因子水平也下降(IL-5、IL-13),而肺组织中仅IL-5表达降低。结论:LncRNA AK085865基因敲除通过减少M2巨噬细胞能有效降低Df1诱导的小鼠过敏性哮喘易感性;LncRNAAK085865调节过敏性哮喘易感性可能与调控M2巨噬细胞与ILC2s细胞分化有关。