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牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrheavirus, BVDV)与猪瘟病毒(HCV)和羊边界病病毒(BDV)同属于黄病毒科瘟病毒属的成员,BVDV除了能够引起牛的病毒毒性腹泻、粘膜病以及繁殖障碍等症状外,还可引起山羊、绵羊、猪、野牛、羊驼、白尾鹿等动物感染。猪主要通过与带毒动物接触或者使用被BVDV污染的疫苗感染BVDV,据报道猪感染BVDV可出现类似于猪瘟的临床症状和病理变化。由于在规模化养殖中混合感染日益严重,而且牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒有着密切的联系,因此猪源牛病毒性腹泻病毒和猪瘟病毒的快速鉴别检测,对于猪群的混合感染、继发感染以及猪瘟疫苗生产中外源基因的检测和猪瘟免疫失败分析有着重要的意义。猪痘病毒(SPV)是痘病毒科,脊椎动物痘病毒亚科,猪痘病毒属中的唯一成员,在自然情况下,SPV只感染猪,并且感染非常温和,能自行康复。由于SPV有生物安全性和临床安全性好、较大的插入外源基因的能力及能诱导宿主产生良好的保护性免疫反应等优点,故适合作为载体用于开发重组疫苗。1猪源牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立与临床运用根据牛病毒性腹泻病毒5’端非编码区基因序列,设计合成了一对特异性引物,经过PCR反应条件的优化,建立了BVDV RT-PCR的检测方法,其PCR产物大小分别为186bp,对于BVDV的检测灵敏度为10TCID50,对于CSFV、PRRSV、PEDV、SPV和PCV的PCR扩增结果均为阴性；用该方法对169份临床样品进行了检测,结果BVDV有20份阳性,阳性率为11.8%,其中124份粪便样有11份阳性,22份组织样有4份阳性,23份猪瘟细胞苗样有5份阳性。成功测出两份阳性样PCR产物序列,并与代表毒株序列比对分析。本实验证明建立的RT-PCR检测方法具有快速、准确、低污染等优点,可用于临床样品中BVDV的检测。2表达BVDV保护性抗原重组猪痘病毒的研制E2是BVDV囊膜糖蛋白含有病毒的主要抗原决定簇,能诱导机体产生保护性免疫反应,是BVDV的主要保护性抗原。本研究以BVDV标准毒株Oregon c24v基因组为模板扩增出E2基因,将E2基因连接到通用克隆载体pUSG11/P28上,构建出转移载体pUSG11/P28E2,利用SPV020和SPV021两基因间的非编码区作为产生重组猪痘病毒外源基因的插入位点,GFP基因作为一个显性筛选标记,获得的重组病毒rSPV-E2.通过PCR、western blotting和间接免疫荧光检测对rSPV-E2进行了鉴定,结果显示rSPV-E2能正确表达E2蛋白,重组猪痘病毒有望成为BVDV疫苗用于预防猪发生BVDV感染。