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该研究根据已报道的小鼠P16基因第一外显子及其上游序列,用PCGEN设计引物,以RAES细胞基因组DNA为模板,用PCR扩增产物作探针筛选鼠基因组文库,获得14.5KBSALI/SALIP16基因组DNA片段.利用筛选文库得到的DNA片段,设计并构建了针对小鼠P16基因对显子1A的普通打靶载体和条件打靶载体.条件打靶载体线性化和电泳纯化后用于对ES细胞电穿孔,经G418和GANCYCLOVIR双药选择后挑选出抗药性克隆24个,获得了一个经SOUTHERN杂交鉴定的阳性克隆.