人乙型肝炎病毒(HBV)是一种双链DNA病毒，能特异性地感染人肝实质细胞，并引发慢性乙肝、肝硬化、肝癌等严重的疾病。由于其感染的肝组织特异性，基于HBV构建的重组病毒载体被认为是理论上最理想的肝脏基因治疗载体之一。同时，由于缺乏合适的细胞模型和动物模型，HBV感染早期的研究陷入了瓶颈，这一领域的研究急需一种带有荧光报告基因的重组乙肝病毒作为研究工具。基于这两点原因，将HBV改造成重组病毒载体的工作已有十多年的研究历史，但在以往的研究中得到的重组病毒往往复制效率很低，距理想的重组病毒载体还有很大的距离。　　本课题中，基于对一株聚合酶spacer区天然缺失了207个碱基的乙肝病毒临床突变株6898的改造，创建了一套新的重组乙肝病毒载体系统，利用该系统，可以容易地制备高复制性的重组乙肝病毒。　　本论文的第一部分工作中，首先在6898的缺失区域中插入了与之等长的HIV tat基因，构建了重组乙肝病毒PHY-6898-tat。发现在重组病毒中的外源基因tat可以很好地表达的同时，重组病毒有很高的复制效率。通过免疫沉淀和氯化铯密度梯度离心实验，证明该重组病毒能在反式补充HBV表面蛋白的情况下，生成完整的病毒颗粒。并且重组病毒颗粒可以通过透射电镜直接观察到。　　本论文的第二部分工作中，为了使重组病毒载体能容纳更大的外源插入片段，针对6898的缺失位点做了进一步缺失，通过构建一系列的缺失突变株，并由southern杂交检测其复制能力，筛选出了新的重组病毒载体，它在不影响病毒复制能力的基础上做了最大程度的缺失，这种突变体被命名为5c3c，并在后续的研究工作中用它来替代6898。利用这种新的重组病毒载体，成功地生成了可以表达红色荧光蛋白报告基因的重组病毒和可以表达干扰素的重组病毒，southern杂交的结果表明，插入这些较大的基因片段后，重组病毒依然保持着较强的复制能力。进一步在重组病毒载体中引入了H1启动子，使其在可以用于表达外源基因之外，还能用于表达特异性的RNA干扰序列。最后通过对树鼩原代肝细胞的感染，证实了重组病毒有和野生型病毒一致的感染能力和感染特异性。　　总之，通过本项研究，(1)建立了一套全新的高效生产重组乙肝病毒的系统，并证明了该系统能产生的病毒颗粒与野生型病毒有相同的形态结构和感染能力；(2)通过该系统，设计并生产出一系列有应用价值的重组病毒，对乙肝病毒感染早期进程的研究和肝脏基因治疗都有一定的推动作用。