肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈现快速上升趋势，死亡率在全球范围内居恶性肿瘤首位。有关肿瘤的免疫逃逸机制是近几年的研究热点，参与机体免疫调控的协同共刺激分子的异常表达在肿瘤免疫逃逸中扮演着非常重要的角色，CD28/B7协同刺激分子免疫超家族的新成员PD-1/PD-L1可介导负性协同刺激信号，有效抑制T、B淋巴细胞的增殖和活化，该抑制途径参与的免疫调控在肿瘤免疫研究中有重要意义。协同刺激分子可以以可溶性和细胞膜型两种形式存在，临床大量研究显示，机体许多可溶性协同刺激分子的表达水平具有诊断或疾病预后判断价值。目前，因缺乏对可溶性PD-L1（sPD-L1）有效的检测方法，国内外对其的研究报道尚不多见，sPD-L1在非小细胞肺癌患者体内表达水平是否异常及其生物学意义值得进一步探讨。鉴于此，本研究应用特异性检测人sPD-L1的ELISA体系对临床非小细胞肺癌患者展开研究，探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者化疗前后血清中sPD-L1的表达水平及其临床意义，初步发现肺癌患者外周血清中sPD-L1的表达异常增高，且其表达水平与肺癌的临床分期、转移和疗效有关；应用活化T淋巴细胞联合PD-L1单抗对肺癌细胞增殖和迁移效应的体外研究中发现，通过PD-L1阻断型单抗作用于PD-1/PD-L1信号通路，T淋巴细胞增殖的能力可以部分恢复，CTL联合PD-L1单抗能增强T淋巴细胞抗肿瘤免疫效应，在体外有效抑制肿瘤细胞的生长和侵袭，探讨以PD-L1为作用靶点，为肺癌的临床治疗提供一种新的免疫干预手段。一、非小细胞肺癌患者化疗前后外周血sPD-L1的动态变化及其临床意义【目的】探讨非小细胞肺癌患者化疗前后血清中可溶性程序性死亡配体1（sPD-L1）的表达水平及其临床意义。【方法】采用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测非小细胞肺癌患者40例（肺癌组）、肺部良性疾病者40例（良性组）和健康体检者40例（对照组）血清中sPD-L1的动态变化，分析sPD-L1与TNM分期、功能状态（PS）评分、肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）及细胞角蛋白19血清片段211（CYFRA211）的相关性。非小细胞肺癌患者采用GP、DP、AP含铂方案全身化疗4周期，化疗前后连续采样。疗效评价按实体瘤疗效标准（RECIST）判定为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）和进展（PD）。【结果】非小细胞肺癌组sPD-L1水平高于良性组和对照组（P<0.05、P<0.01）。达客观缓解的肺癌患者化疗后血清sPD-L1水平比化疗前显著降低（P<0.01）；疾病进展的肺癌患者化疗后sPD-L1比化疗前显著升高（P<0.01）。肺癌患者sPD-L1异常高表达与PS评分、TNM分期中淋巴结转移及远处转移密切相关（P<0.05）。受试者工作特征曲线（ROC）显示sPD-L1与肿瘤标志物CEA、CYFRA211及NSE密切相关。【结论】肺癌患者外周血清中sPD-L1的表达异常增高，且与肺癌的分期、转移和疗效有关。sPD-L1的表达水平可以反映非小细胞肺癌肿瘤负荷，将来可能成为新的疗效及预后预测因子。二、活化T淋巴细胞联合PD-L1单抗对肺癌细胞增殖和迁移效应的体外研究【目的】检测肺癌细胞系H1299，SPC-A1，A549中膜型程序性死亡配体-1（Programmed death-1ligand1,PD-L1）的表达水平，初步探讨活化T淋巴细胞（CTL）联合PD-L1单抗对不同肺癌细胞作用的影响。【方法】将H1299，SPC-A1，A549三种肺癌细胞培养于含10％灭活小牛血清的RPMI-1640培养基中，采用RT-PCR技术和流式细胞术检测三种细胞系中PD-L1的表达情况；CCK-8法检测三种肺癌细胞与刺激活化的人外周血T淋巴细胞共培养72h后T细胞的增殖水平；划痕实验观察CTL及CTL联合PD-L1单抗作用于三种肺癌细胞后肺癌细胞的迁移侵袭能力。【结果】三种肺癌细胞H1299，SPC-A1，A549细胞膜表面表达PD-L1呈高，中，低表达。CTL联合抗PD-L1单抗组较CTL组可进一步增强T淋巴细胞增殖。肺癌细胞株H1299，A549的迁移侵袭能力优于SPC-A1。与肺癌细胞共培养12h，24h，48h后CTL联合抗PD-L1单抗组较CTL组更显著的抑制肿瘤细胞的迁移。【结论】CTL联合PD-L1单抗能增强T淋巴细胞抗肿瘤免疫效应，在体外有效抑制肿瘤细胞的生长和侵袭。综上所述，本课题研究得出以下结果：（1）运用人sPD-L1ELISA试剂盒，研究发现NSCLC患者外周血清中sPD-L1的表达异常增高，且其高表达与肺癌的临床分期、淋巴结转移和疗效有关。（2）通过PD-L1阻断型单抗作用于PD-1/PD-L1信号通路，T淋巴细胞增殖的能力可以部分恢复，CTL联合PD-L1单抗能增强T淋巴细胞抗肿瘤免疫效应，在体外有效抑制肿瘤细胞的生长和侵袭。