纳米金粒子对肿瘤细胞辐射敏感性影响的研究

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目的:本课题分别用MPA-PEG、 SH-PEG-O-CH3修饰纳米金粒子,制备AuNPs@MPA-PEG、 AuNPs@PEG纳米粒子,通过检测不同浓度AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG纳米粒子联合X射线照射的条件下Hela细胞的存活率,检测AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG在Hela细胞及细胞核的分布。研究AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG对Hela细胞辐射敏感性的影响。方法:采用柠檬酸钠为稳定剂、硼氢化钠为还原剂,还原氯金酸制备纳米金粒子,并用MPA-PEG、SH-PEG-O-CH3修饰纳米金粒子,激光粒径分析仪和紫外-可见光分光光度计分别测纳米金粒子的粒径分布和吸收光谱;用台盼蓝染色法检测细胞活性,研究不同浓度AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG对Hela细胞增殖的抑制作用;克隆形成法检测AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG对X射线照射条件下Hela细胞存活率的影响;通电感耦合等离子体发射光谱仪测量每个细胞及细胞核对AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG的吸收量。结果:(1)反应温度为75℃时,将硼氢化钠和柠檬酸钠的混合液加入氯金酸溶液中可以制备尺寸均匀、粒径小的纳米金粒子。与常温条件下制备的纳米金粒子相比较,反应温度为75℃的纳米金粒子的吸收光谱的吸收峰明显发生蓝移,而反应温度为100℃的纳米金粒子的吸收光谱的吸收峰又发生红移。在常温的条件下将氯金酸加入到柠檬酸钠和硼氢化钠的混合液中制备的纳米金粒子的吸光谱与其他试剂加入vbm/*`123456顺序制备的纳米金粒子的吸光谱相比,吸收峰明显发生蓝移。MPA-PEG、+654321``1a34SH-PEG-O-CH3修饰纳米金粒子一个月前后的吸收光谱没有发生明显的变化。(2)用纳米金粒子溶液处理Hela细胞,当纳米金粒子浓度小于3940μg/L时,随着浓度的增加和处理时间的延长,AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG对Hela细胞的增殖都没有表现出明显的抑制作用。(3)每个细胞及细胞核对AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG的吸收结果显示:当浓度小于4728μg/L时,细胞和细胞核内纳米金粒子量随着AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG浓度的增加而增加。每个细胞及细胞核对AuNPs的吸收量都要比对AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG的吸收量大得多(p<0.01),但是细胞及细胞核对AuNPs@MPA-PEG的吸收量还是大于对AuNPs@PEG的吸收量(p<0.05)。AuNPs@MPA-PEG在细胞质和细胞核中的质量比为0.9-2.5,比AuNPs和AuNPs@PEG组在细胞质和细胞核中的质量比都要小。(4)克隆形成抑制实验检测细胞辐射后细胞存活率结果显示: AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG在浓度为492-4728μg/L范围内,不同照射剂量组间的存活分数无显著性差异。从剂量存活曲线中可以看出纳米金粒子照射组“肩区”和直线斜率部分都没有明显的变化(p>0.05)。结论:(1)在一定温度范围内,纳米金粒子的粒径随反应温度的升高而减小。常温条件下,将氯金酸加入到柠檬酸钠和硼氢化钠的混合液中制备的纳米金粒子的粒径最小。MPA-PEG、SH-PEG-O-CH3修饰的纳米金粒子可以长期保持稳定。(2) AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG对Hela细胞的增殖都没有表现出明显的抑制作用。(3)细胞和细胞核对AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、 AuNPs@PEG的吸收量对浓度有依赖性。但MPA-PEG、SH-PEG-O-CH3对纳米金粒子进行修饰不能够促进细胞对纳米金粒子的吸收。MPA-PEG对纳米金粒子进行修饰,有利于纳米金粒子聚集在细胞核内。(4)浓度在492-4728μg/L范围内,AuNPs、AuNPs@MPA-PEG、AuNPs@PEG对Hela细胞都没有产生显著地辐射增敏作用。
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