为探索构建广谱高效的抗感染新型制剂，本实验应用重叠区PCR（overlapextension PCR）技术构建了ESC、citropin1.1和DHV4三种抗菌肽（分别略写为ESC、CITI和DHV4）的融合基因（命名为ECD）。为了保证结构域不相互干扰，在融合基因中加入了由甘氨酸和丝氨酸组成的柔性连接肽序列（Gly+Gly+Gly+Ser+Gly+Gly+Ser和Gly+Gly+Ser+Gly+Gly+Ser+Gl），并用软件ANTHEPROT 5.0对其序列和结构进行调整。考虑到原核表达时大肠杆菌对密码子的偏好性，本实验对融合肽基因序列作了同义突变，设计并合成了四条70bp左右的片段，采用重叠区PCR法，利用高保真Pfu DNA聚合酶扩增出融合肽基因。 构建了pGEX-4T-1-ECD（略为pG-ECD）原核表达载体并作BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ酶切、质粒PCR和测序验证。将正确构建的融合蛋白表达载体转化大肠杆菌DH5α和BL21（DE3），用2x YTA培养基培养，以IPTG诱导表达，作SDS-PAGE分析表达情况。结果表明，该GST-融合蛋白分子量为33kD，与预测的大小相符；该融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中、0.5mmol/LIPTG和28℃诱导温度下表达效果最好，但表达量与pGEX-4T-1空对照相比相对较少；其表达量在4 h内与诱导时间成正相关；同时该融合蛋白主要以可溶形式存在。为进一步研究其诱导表达条件及生物学功能奠定了基础。 融合基因表达培养液经破碎裂解得到融合蛋白上清粗制品，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱吸附，PBS缓冲液温育洗脱后，在96孔板上初步检测该融合蛋白对四种标准菌株――大肠杆菌（Escherichiacoli）ATCC25922、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC26112、肺炎链球菌（Streptococcus penumoniae）ATCC49619和绿脓杆菌（Pseudomonasaeruginosa）ATCC10211的抑制活性（用氨苄青霉素、溶菌酶和GST表达蛋白分别作阴阳性对照）。结果表明，该融合蛋白对上述四种革兰氏阴阳性有害菌有较明显的抑制作用，为进一步研究其体内生物活性及研制开发新型动物抗菌制剂奠定了可靠的基础。