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药用植物内生菌与宿主在长期进化的过程中,能够产生与宿主相同或相似的药用活性代谢产物,已成为人们寻找新型药物的重要来源。本研究以宁夏枸杞为材料,对其各药用组织器官中内生菌的多样性和分布特征进行研究,通过检测菌株的抑菌活性、抗氧化活性和细胞毒活性,旨在筛选出具有药用价值的枸杞内生菌。为探究内生菌活性物质的合成机理及其与宿主植物的协同进化关系、揭示内生菌与道地药材之间的相关性研究奠定基础。主要研究内容与结果如下:(1)采用组织匀浆法从枸杞花、果、叶、根皮中分离出81株内生菌,其中内生细菌39株、内生放线菌11株、内生真菌31株。16S rRNA和rDNA-ITS序列分析结果表明,内生细菌属于7科11属,芽孢杆菌属Bacillus为优势属,分布于所有组织器官中;内生真菌属于1科3属,曲霉菌Aspergillus为优势类群;内生放线菌属于3科4属,多为链霉菌Streptomyces;内生细菌的数量在不同器官中表现为根皮>叶>花>果实;而多样性分布表现为花>叶>根皮>果实。(2)以5种病原菌为指示菌,采用琼脂扩散法,对46株菌的抑菌活性进行测定,结果表明,有29株内生菌对一种或多种病原菌表现出不同的拮抗活性;其中Bacillus菌株EBR2、EBR7、EBL3和短波单胞菌属Brevundimonas的EBR3对番茄炭疽杆菌Colletotrichum nigrum和玉米大斑病菌Exserohilum turcica拮抗活性最强。多数菌株对大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌5taphylococcus aureus的生长没有明显抑制作用。内生真菌对5种供试病原菌均未表现出拮抗活性。放线菌微杆菌属Microbacterium菌株EAF8对金黄色葡萄球菌的生长有较强的抑制活性。(3)通过F enton反应法和T-AOC法对菌株的羟自由基清除能力和总抗氧化能力进行测定,结果表明26株枸杞内生菌具有抗氧化能力,但差异较大。其中内生真菌的抗氧化活性相对较强,内生放线菌次之,内生细菌最弱。Aspergillus菌株EFL6、EFL1、EFL9抗氧化活性最强。EFL6总抗氧化能力为(188.5±0.549)U·mL-1,羟自由基清除能力IC50为0.3 mg·L-1,菌株EFL1的IC50为0.42 mg.L-1,菌株EFL9总抗氧化能力为(113.63±1.021)U’mL-1。(4)以肿瘤细胞A549和Hela为指示细胞系,采用MTT法与CCK-8法,对36株内生菌代谢产物的细胞毒活性进行研究。结果表明有31株内生菌至少对一种肿瘤细胞的生长有抑制作用,17株菌对2种肿瘤细胞的生长都有抑制活性。内生真菌的细胞毒活性强于内生细菌和内生放线菌,曲霉属么spergillus菌株EFL1对肿瘤细胞的抑制活性最强,对肿瘤细胞A549与Hela细胞的IC50分别为0.22x 102mg/L与0.28×102 mg/L。宁夏枸杞可培养内生菌遗传多样性丰富,具有较强的抑菌、抗氧化、抗肿瘤活性。