钼镉联合通过钙稳态失调和未折叠蛋白反应诱导鸭大脑组织自噬

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为了探讨钙稳态失衡和未折叠蛋白反应介导的自噬是否参与了钼镉联合诱导的鸭大脑组织毒性,实验选用七钼酸铵((NH4)6Mo7O24·4H2O)和硫酸镉(3Cd SO4·8H2O)分别作为钼源和镉源。选取160羽8日龄健康的绍兴鸭,随机分为4组(每组40只),饲喂含不同剂量Mo(100 mg/kg)或/和Cd(4 mg/kg)的基础日粮。在实验的第16周,采集每组鸭的大脑组织,根据检测需要处理和保存样品。利用酶标仪、电感藕合等离子体质谱仪、透射电镜、共聚焦显微镜、RT-q PCR和免疫印迹分别检测ATP酶活性、常量元素含量、组织病变和自噬小体结构、LC3II荧光聚点以及钙稳态、未折叠蛋白反应和自噬相关因子的表达水平。结果如下:1.与Control组相比,所有处理组Ca2+ATP酶、Mg2+ATP酶、Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶的活性显著降低、K和Na含量降低,Mg和Ca含量升高,钙稳态相关因子(CaMKIIα、CaN、IP3R和CRT)的mRNA和蛋白表达水平显著上调,并且在Mo+Cd组上述指标的变化尤为显著。由此可见,Mo或/和Cd能够导致鸭大脑组织钙稳态紊乱。2.与Control组相比,所有处理组未折叠蛋白反应相关基因(PERK、GRP78、e IF2α、ATF4、IRE1和ATF6)mRNA的表达水平以及PERK、IRE1和ATF6蛋白的表达水平显著升高,并且在Mo+Cd组中上述指标的变化尤为显著。由此可见,Mo或/和Cd能够激活鸭大脑组织内质网应激并启动未折叠蛋白反应。3.与Control组相比,所有处理组自噬小体和LC3II免疫荧光聚点增加,自噬相关基因Beclin-1、Atg5、LC3A和LC3B mRNA的表达水平以及Beclin-1和LC3II/LC3I蛋白的表达水平显著升高,Dynein和p62 mRNA的表达水平以及p62蛋白的表达水平显著下调,并且在Mo+Cd组中上述指标的变化尤为显著。由此可见,Mo或/和Cd能够诱导大脑组织发生细胞自噬。综上所述,钼或/和镉能够导致鸭大脑组织发生钙稳态失衡、激活未折叠蛋白反应和诱导自噬。因此,钼或/和镉诱导的鸭大脑组织细胞自噬可能与钙稳态失衡和未折叠蛋白反应之间的串扰激活有关,并且钼镉联合可加剧大脑组织毒性。
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