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目的:本课题主要研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路调节基因Smad2/3,Smad4表达的影响,以求进一步探讨壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的作用机制。
方法:选用健康清洁级Wistar大鼠120只,雌雄各半,体重220~250g,随机取16只作为正常对照组(A组)。剩余大鼠进行HF造模。采用CCL4复合因素造模法。给予大鼠高脂低蛋白食物(以玉米面为饲料,加0.5%胆固醇,实验第1、2W加20%猪油),10%酒精为唯一饮料,皮下注射CCL4(第1次用5ml/kg体重,以后每隔3天皮下注射40%CCL4油剂3ml/kg体重)。为了防止肝脏自然修复对实验结果的影响,各组于用药开始后仍每周注射40% CCL4油剂3ml/kg体重1次(A组除外)。于第4W末,随机处死8只证实HF形成后做相关检测。从造模大鼠中随机取96只,随机分为病理模型组(B组)、壮肝逐瘀煎颗粒剂大剂量(成人20倍量)、中剂量(成人10倍量)、小剂量(成人5倍量)治疗组(C,D,E组)、秋水仙碱对照组(F组)、大黄蟅虫丸对照组(G组)共6组,每组16只。造模4W后各组分别予以灌胃给药,A组正常饲料喂养,灌胃与治疗组同容积的生理盐水;B组灌胃与治疗组同体积的生理盐水;C,D,E组给予壮肝逐瘀煎免煎颗粒剂,剂量分别为10g/kg体重、5g/kg体重、2.5g/kg体重;F组灌服秋水仙碱100μg/kg体重;G组灌服大黄蟅虫丸1.5g/kg体重。以上各组灌胃液体量为10ml/kg体重,均给药1次/天,其浓度及等效剂量按体表面积折算,共给药12W.A,B,C,D,E,F,G各组分别于用药治疗后6W,12W,禁食12h,随机每组选取8只大鼠称重后处死动物,剖取肝脏、并取肝脏右叶相同部位固定于10%甲醛中,石蜡包埋、切片,分别行HE,免疫组化染色。
结果:1.壮肝逐瘀煎能够明显减轻大鼠肝纤维化程度,具有较强的保肝、抗肝纤维化作用(P<0.01)。2.免疫组化结果表明,模型组大鼠肝内Smad2/3,Smad4表达明显增强,Smad2/3表达主要集中在纤维间隔中,Smad4的表达主要位于门脉系统、纤维间隔和肝小叶之间的非实质细胞。壮肝逐瘀煎高剂量、中剂量组与模型组比较肝组织中Smad2/3,Smad4的含量显著性降低(P<0.01);经壮肝逐瘀煎治疗后的肝纤维化犬鼠,肝组织结构改善,Smad2/3,Smad4表达下调,表明壮肝逐瘀煎对TGF-β/Smad信号通路具有一定的干预作用。
结论:壮肝逐瘀煎干预性治疗能够明显降低CCL4诱发的肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号传导通路中Smad2/3,Smad4的表达,从而有效地阻断TGF-β/Smad通路的信号传导,这可能是其促使肝纤维化逆转的重要机制之一。