论文部分内容阅读
目的:探讨自噬在角膜上皮细胞空气暴露损伤中的作用及内在机制。 方法:以人角膜上皮细胞系和C57BL/6小鼠建立角膜空气暴露损伤模型。透射电子显微镜检测损伤过程中细胞结构的变化;免疫荧光染色、免疫印迹和实时荧光定量PCR等方法检测损伤过程中自噬相关基因以及炎症相关因子的表达变化;TUNEL染色检测细胞凋亡的发生。 结果:透射电子显微镜观察到空气暴露培养的HCE细胞中自噬泡的存在。进一步通过免疫荧光染色和免疫印迹等检测方法证实随着空气暴露培养时间的延长,细胞中LC3(LC3Ⅱ)表达显著增强。TUNEL染色显示加入氯喹和3-MA等自噬抑制剂能够明显增加空气暴露培养中的HCE细胞的凋亡比率。在小鼠角膜暴露损伤模型中,暴露处理前期角膜中自噬水平逐渐增加,此时角膜中凋亡细胞数量同步增加。通过腹腔注射3-MA后小鼠角膜上皮凋亡细胞明显增加,而自噬激活剂组较对照组减少。提示自噬能够在一定程度上抑制小鼠暴露损伤模型中角膜上皮细胞的凋亡。免疫印记检测结果显示p-AKT含量持续减少并且p-p38表达明显增加,表明在暴露损伤模型可能通过AKT和p38通路共同调节下游mTOR相关信号通路以影响自噬,促进角膜上皮细胞的存活。 结论:空气暴露损伤可诱导角膜上皮发生自噬,自噬在一定程度上有利于维持眼表微环境,促进角膜上皮细胞存活。