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口腔鳞状细胞癌是一种恶性的头颈部肿瘤,易发生局部复发和转移,口腔鳞状细胞癌的发展是一个长期、多阶段、多因素的过程,许多调控因子参与其中。尽管公认的口腔鳞状细胞癌是一种分子水平的疾病,但其分子机制还不是很清楚,所以,口腔鳞状细胞癌的早期筛查和预测对于口腔鳞状细胞癌疾病的研究至关重要。近年来科研人员试图从基因蛋白水平打开突破口,并且己经在乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌等的研究中取得了丰硕的成果。 基因芯片作为一种新的技术,是目前应用最多的一种生物芯片,它将成千上万的DNA探针与靶基因放置在一个小小的芯片上,用以确定不同样本中基因的表达。我们通常用此办法来对比口腔鳞状细胞癌组织与对照组(正常组织)间,不同亚型的口腔鳞状细胞癌。从这些研究中,人们逐步了解了疾病的机制,掌握了有效的方法检测和诊断疾病和预测标志物,对今后的诊断和治疗有着重要的意义。 本研究利用基因芯片数据筛选口腔鳞状细胞癌的基因,具体内容如下: 1.口腔鳞状细胞癌基因芯片数据的获取和处理。首先通过GEO数据库,选择下载对应的口腔鳞状细胞癌组织和对照组(正常组织)微阵列数据,结合RMA等软件初筛。从54676个基因中共筛选出78个显著差异表达基因,包括46个上调基因和32个下调基因。 2.口腔鱗状细胞癌基因芯片数据的生物信息学差异性分析。通过GSEA将初筛过程中变化明显的基因进行差异表达分析。GO表明,初筛出来的基因与表皮生长、细胞外区和细胞因子活性有关。为探讨口腔鱗状细胞癌差异基因的相互作用,本研究通过利用STRING数据库,对差异基因进行蛋白网络交互分析。从而形成网络通路,并利用相关数据库,如NCBI、DAVID等,对相关节点进行功能性分析,从中得出与此相关的靶基因。蛋白质网络的交互证明口腔鳞状细胞癌的关键基因,包括CXCL10,IFI6,IFI27,ADAMTS2,COL5A1。 3.口腔鱗状细胞癌差异基因的体外和体内实验验证。使用RT-PCR对其高表达基因表达量进行验证,然后选择CXCL10基因转染口腔鳞状细胞癌细胞,在体外和体内实验进行验证。结果表明,CXCL10的siRNA转染能抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭。 通过以上分析,建立了一种基于基因芯片数据预测口腔鳞状细胞癌标志物的方法,通过对显著差异表达的基因的功能分析和验证,明确了CXCL10的表达调控有助于筛选口腔鳞状细胞癌生物标志物。同时结合GO和STRING结果,找到新的调控基因。我们将在后期实验中验证,从而明确这些基因蛋白之间相互作用关系,为未来口腔鳞状细胞癌的治疗打下坚实的基础。