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目的:缺血性心脏病已经成为危害人类身体健康和生命安全的第一杀手疾病。在我国,每年由冠状动脉堵塞导致心肌梗死的新发病人多达200万。病人发生心梗后,心肌细胞大量死亡,而内源性的心肌细胞再生能力极弱,病人发生左心室重构,导致纤维疤痕代替了心肌组织。心梗病人的心功能急剧下降,心脏由于心肌组织被疤痕替代增加了其破裂的风险,此外,心梗后的病人极易发展为心衰。然而,现有的治疗无法治愈心梗只能延缓病情的发展。心梗后的细胞移植治疗为外源性恢复梗死心肌细胞提供了可能性。近年来,心血管前体细胞由于其具有分化为心肌细胞、内皮细胞和平滑肌细胞的能力以及旁分泌作用,被研究者们进行了广泛的研究。本研究建立了心梗后1周移植人多能干细胞分化获得心血管前体细胞的动物疾病治疗模型,优化了移植细胞的方案,明确了细胞移植后治疗心梗的一些表型,为探讨心血管前体细胞移植治疗心梗的机制提供可能,为心血管前体细胞的临床试验奠定基础。 方法:通过CRISPR/Cas9技术建立带有GFP标记的hiPSCs系,碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色证实hiPSCs-GFP的未分化状态;单层分化诱导hiPSCs-GFP向心血管前体细胞和心肌细胞分化,通过免疫荧光和流式检测其分化效率;建立起小鼠心梗模型及心梗后1周二次开胸移植细胞模型,心动超声确保模型的可比性和评价细胞移植后的心功能改善情况,masson染色分析细胞移植后纤维化程度的改善情况,免疫荧光分析心脏成纤维细胞的激活情况;体外建立起成年小鼠心脏成纤维细胞的激活模型,Q-PCR、western和免疫荧光水平分析hiPSCs-CVPCs(hCVPCs)的培养上清(hCVPCs-CM)对成纤维细胞的作用。 结果:1)掌握了无滋养层体系培养人多能干细胞技术,并能够维持其未分化的状态;2)掌握了应用CRISPR/Cas9技术改造人多能干细胞基因组技术;3)掌握了从人多能干细胞向心血管前体细胞及心肌细胞分化的方法;4)掌握并建立了小鼠心肌梗死模型及心梗1周后二次开胸移植细胞方法,并优化了细胞移植载体;5)证实了hCVPCs在移植后能够保护心功能,减小梗死面积;6)发现体内移植hCVPCs后,促进心脏成纤维细胞激活,体外hCVPCs-CM也促进成年小鼠心脏成纤维细胞激活。 结论:成功地构建了hiPSCs-GFP细胞系。通过建立小鼠心梗后1周移植细胞模型,证实了hCVPCs移植后保护心功能,减小梗死面积;发现hCVPCs移植后能够促进边缘区心脏成纤维细胞的激活,成年小鼠心脏成纤维细胞体外激活模型也同样发现hCVPCs-CM能够促进成纤维细胞的激活。