论文部分内容阅读
目的:观察Toll样受体4(TLR4)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中的作用,并探讨血管紧张素(Ang)-(1-7)对上述反应的作用及其可能的作用机制。方法:对HUVECs进行体外培养,将细胞分为6组进行干预,分别为对照组(不干预)、ox-LDL组(以ox-LDL 75mg/L干预)、ox-LDL+Ang-(1-7)组[Ang-(1-7)1μmol/L预处理30min后,以ox-LDL 75mg/L干预]、ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组[A-779(Mas受体阻断剂)1μmol/L预处理30 min,然后以Ang-(1-7)1μmol/L预处理30min,再以ox-LDL75mg/L干预]、ox-LDL+A-779组(A-779 1μmol/L预处理30min后,以ox-LDL 75mg/L干预)、ox-LDL+HTA125组[HTA125(TLR4特异性阻断抗体)10μg/L预处理30 min后,以ox-LDL 75mg/L干预],给予上述干预条件共培养24h后,分别以膜联蛋白Ⅴ(Annexin-Ⅴ)-FITC/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡,DCFH-DA标记法检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-q PCR)检测TLR4和NADPH氧化酶4(NOX4)的m RNA表达水平,Western Blot检测TLR4和NOX4的蛋白表达水平。结果:(1)AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞术显示,ox-LDL组的细胞凋亡比例高于对照组[(21.18±1.40)%比(1.59±0.26)%,P<0.01],ox-LDL+Ang-(1-7)组[(7.42±1.07)%]和ox-LDL+HTA125组[(9.19±1.01)%]与ox-LDL组相比,细胞凋亡比例均降低(P均<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组[(19.91±1.30)%]和ox-LDL+A-779组[(20.47±0.95)%]的细胞凋亡比例均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。(2)TUNEL法显示,ox-LDL组的细胞凋亡比例高于对照组[(10.83±0.77)%比(2.83±0.82)%,P<0.01],ox-LDL+Ang-(1-7)组[(3.66±0.54)%]和ox-LDL+HTA125组[(4.97±0.60)%]与ox-LDL组相比,细胞凋亡比例均降低(P均<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组[(10.69±0.62)%]和ox-LDL+A-779组[(11.43±0.42)%]的细胞凋亡比例均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。(3)ox-LDL组的ROS水平高于对照组(0.093±0.014比0.053±0.011,P<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)组(0.063±0.011)和ox-LDL+HTA125组(0.070±0.010)的ROS水平均低于ox-LDL组(P<0.01,P<0.05),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组(0.088±0.003)和ox-LDL+A-779组(0.095±0.005)的ROS水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。(4)ox-LDL组NOX4的m RN A表达水平高于对照组(11.74±0.65比1.00±0.00,P<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)组(2.85±0.75)和ox-LDL+HTA125组(5.57±0.52)NOX4的m RNA表达水平均低于ox-LDL组(P均<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组(10.51±0.54)和ox-LDL+A-779组(11.04±1.01)NOX4的m RNA表达水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。ox-LDL组TLR4的m RNA表达水平高于对照组(27.60±1.86比1.00±0.00,P<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)组(8.00±1.03)和ox-LDL+HTA125组(14.83±0.97)TLR4的m RNA表达水平均低于ox-LDL组(P均<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组(24.81±2.19)和ox-LDL+A-779组(26.64±0.65)TLR4的m RNA表达水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。(5)ox-LDL组NOX4的蛋白表达水平高于对照组(0.61±0.09比0.23±0.02,P<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)组(0.27±0.03)和ox-LDL+HTA125组(0.22±0.02)NOX4的蛋白表达水平均低于ox-LDL组(P均<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组(0.58±0.06)和ox-LDL+A-779组(0.61±0.03)NOX4的蛋白表达水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。ox-LDL组TLR4的蛋白表达水平高于对照组(0.18±0.02比0.08±0.01,P<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)组(0.07±0.01)和ox-LDL+HTA125组(0.09±0.01)TLR4的蛋白表达水平均低于ox-LDL组(P均<0.01),ox-LDL+Ang-(1-7)+A-779组(0.18±0.02)和ox-LDL+A-779组(0.20±0.02)TLR4的蛋白表达水平均高于ox-LDL+Ang-(1-7)组(P均<0.01)。结论:TLR4在ox-LDL诱导的HUVECs损伤中起着介导性作用,Ang-(1-7)通过Mas受体对细胞产生保护作用。