论文部分内容阅读
目的:在课题组前期研究基础上,从创新炮制方法、胃肠液代谢、体内代谢产物、代谢组学、复方抗氧化活性、复方生发乌发活性、复方化学成分溶出率的角度继续深入研究何首乌生熟异用的炮制理论,明确生熟饮片在复方中药理作用的异同,为生熟异用饮片的临床配伍应用提供依据。方法:1,将何首乌分别经冷冻干燥法和七种传统炮制方法处理后,采用反相高效液相(RP-HPLC)法测定其中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量。2,将生、制何首乌浸膏分别经人工胃肠液反应得到产物后,采用RP-HPLC法测定其中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量。3,将生、制何首乌经适当处理后,注入液质联用系统中,全面检测其化学成分。4,将生、制何首乌浸膏灌胃SD大鼠后收集其代谢产物,采用液质联用技术定性检测其成分在体内代谢的变化规律。5,生、制何首乌饮片分别纳入到常用方剂精乌胶囊中进行生熟饮片互换配伍,用DPPH法、FRAP法、羟基自由基清除率法测定其抗氧化活性;灌胃雄性健康C57BL6/N小鼠,测定小鼠毛发长度及黑色素含量,测定小鼠皮肤中成角化细胞生长因子(FGF-7)、黑色素1受体(MC1R)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、黑色素细胞刺激素(MSH)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、音速刺蛋白(SHH)浓度;将所得生、制精乌胶囊经适当处理后,采用RP-HPLC法测定其中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量。结果:1,不同炮制含量对比发现,二苯乙烯苷含量:冻干品>生品>黑豆汁制>黑豆汁姜汁制>黑豆汁甘草汁制>黄酒制>黑豆汁黄酒制>清蒸制。游离型大黄素含量:黑豆汁制>生品>黄酒制>黑豆汁黄酒制>黑豆汁姜汁制>黑豆汁甘草汁制>清蒸制>冻干品。游离型大黄素甲醚含量:黑豆汁制>生品>黄酒制>黑豆汁姜汁制>黑豆汁黄酒制>黑豆汁甘草汁制>清蒸制>冻干品。2,生何首乌配伍前后三种成分含量均有不同程度的下降,其中二苯乙烯苷下降幅度较小,为7.6%;游离大黄素下降64%;游离大黄素甲醚下降129%。制何首乌配伍前后三种成分含量除二苯乙烯苷含量有轻微上升(为7.7%),其他两种成分呈现下降趋势(游离大黄素下降51.7%;游离大黄素甲醚下降152%)。3,从何首乌全成分液质联用热图中抽提出1105个化合物进行聚类分析,主成分分析(PCA)法生品和熟品分类良好,与生何首乌相比,炮制后共有344个特征峰发生显著变化,其中97个特征峰含量升高,247个特征峰含量降低。偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)的VIP得分图显示,VIP值大于1的共有344个特征峰,炮制后97个特征峰含量升高,约占28%,247个特征峰含量降低,约占72%。4,人工胃液:与生何首乌组相比制何首乌中二苯乙烯苷、游离大黄素、游离大黄素甲醚溶出率均较高,其中二苯乙烯苷溶出率差异较小,游离大黄素、游离大黄素甲醚溶出率差异较大。人工肠液:生何首乌中三种成分的溶出率均较制何首乌中三种成分高。5,何首乌炮制前抗氧化能力强于炮制后,且从二苯乙烯苷(TSG)的数值来看,TSG表现出了较强的抗氧化能力。生何首乌制备的生精乌胶囊抗氧化能力强于制何首乌制备的制精乌胶囊。6,生精乌胶囊与制精乌胶囊均有促进毛发生长的作用,且都呈一个时间的趋势,随着时间的推移,毛发越来越长,且波动性也越来越小,但制精乌胶囊组毛发生长效果无论是起效速度还是毛发长度均好于生精乌胶囊组。分析发现生精乌胶囊组起效较制精乌胶囊组快,但持续性短;相反,制精乌胶囊组起效较缓但在能够随着时间的延长而表现出较高的生发乌发指标和较长的持续时间。从毛发黑色素测定值可以看出,制精乌胶囊能够较显著的提升毛发中黑色素的含量。7,采用液质联用技术分析了生、制何首乌灌胃大鼠后代谢产物三种化学成分的变化,未在尿液和粪便中检测到二苯乙烯苷、大黄素甲醚及其相关代谢产物,在尿液中检测到了大黄素原型成分,而在粪便中未检测到。结论1,冷冻干燥法能够较好的保存鲜何首乌中的二苯乙烯苷成分。2,何首乌中二苯乙烯苷经炮制、经胃肠液、经配伍含量变化较小,而大黄素及大黄素甲醚含量变化较大。3,二苯乙烯苷对何首乌抗氧化活性及生发、乌发活性影响较大。4,将何首乌开发作为抗氧化及生发、乌发药物应注意保留其二苯乙烯苷成分。