研究背景：去势抵抗型前列腺癌(Castration resistant prostate cancer, CRPC)是目前临床治疗的难点和基础研究的热点,多西他赛是目前临床上CRPC化疗的一线药物3。其作用机制是：多西他赛进入细胞后能优先结合β-微管蛋白,导致微管在缺少GTP和其他一些辅助蛋白因子时发生聚合,这种静态的聚合破坏了细胞正常的有丝分裂过程,并使细胞分裂停滞于G2/M期,最终将导致细胞凋亡。此外,多西他赛还能诱导Bcl-2蛋白的磷酸化,最终导致肿瘤细胞凋亡。但令人遗憾的是临床上使用多西他赛化疗,肿瘤缓解率仅为12.1%4,中位生存期仅延长2.5个月。且由于遗传性或获得性耐药的产生,化疗敏感性逐渐降低5。这种耐药性的产生的机制还不明确,因而也成为研究的热点。睾丸孤核受体4(Testicular receptor4, TR4)是类固醇家族中的一员,TR4是NR2C2基因编码的一种转录因子,又名TAK16。TR4广泛分布于体内各器官。目前发现的TR4靶基因有很多,如脂质蛋白A,CD36,磷酸烯醇式丙酮酸激酶等。大量的研究表明TR4与脂质代谢、糖代谢,中枢神经发育、小脑发育、红细胞代谢等重要生理功能密切相关。前期研究还发现,TR4阴性细胞(TR4-/-,来源于TR4基因敲除小鼠)与正常细胞(来源于野生型小鼠)相比,氧化应激、基因修复等功能受损7-11,而氧化应激、基因修复等功能与肿瘤的发生发展有关。在我们的预实验中,经过多西他赛处理的前列腺癌细胞PC3细胞TR4表达水平升高,提示了TR4与多西他赛化疗可能存在关联,但国内外较少有TR4与前列腺癌多西他赛相关方面的研究报道。研究目的：本项研究主要的目的是通过细胞及临床组织两个层面明确TR4与前列腺癌多西他赛化疗敏感性之间的关系,并探讨其可能的机制。研究方法：1.运用慢病毒感染技术建立不同TR4表达水平的前列腺癌细胞系。采用MTT法检测不同TR4表达水平的PC3细胞药物半数致死量(half maximal inhibitory concentration,IC50)2.采用MTT法检测不同TR4表达水平的PC3细胞在多西他赛的作用下,不同时间点细胞的存活情况。3.采用凋亡检测法检测在多西他赛作用下,TR4表达水平对细胞凋亡的影响。4.运用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)技术检测接受多西他赛化疗后不同预后前列腺癌穿刺标本TR4表达水平,观察TR4表达水平与前列腺癌化疗效果之间的联系,在临床层面验证细胞实验的结果。研究结果：1.运用慢病毒感染技术,我们建立了TR4基因敲除前列腺癌细胞系(PC3scr/siTR4)和TR4基因过表达细胞系(PC3vector/TR4).MTT实验表明,在TR4敲除细胞系,PC3siTR4相对PC3scr细胞多西他赛的IC50下降,TR4过表达细胞PC3TR4相对PC3vector细胞多西他赛IC50升高。2.生长曲线实验表明,在多西他赛持续作用下,PC3siTR4存活情况不及PC3scr。与此相对应的是,在多西他赛持续作用下,PC3TR4存活情况优于PC3vector.3.凋亡检测发现,在多西他赛作用下,TR4敲除细胞凋亡率升高,TR4过表达细胞凋亡率降低。4.免疫组化结果表明,TR4表达水平高低与多西他赛化疗效果负相关,在化疗效果差(PSA下降<50%)的病人中,TR4表达水平相对较高；在化疗效果好(PSA下降>50%)的病人中,TR4表达水平相对较低。结论：TR4降低了前列腺癌多西他赛化疗敏感性,其可能的作用机制为调节凋亡。TR4有可能成为预测前列腺癌多西他赛化疗效果的标志物。多西他赛联合TR4靶向治疗可能成为治疗前列腺癌的新手段。