【摘 要】
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本研究对动蛋白异型体AtKP1的表达部位以及生物学功能进行了如下研究: 首先利用半定量RT-PCR的方法对拟南芥不同器官中AtKP1的表达进行了分析,结果显示,拟南芥动蛋白异型体At
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本研究对动蛋白异型体AtKP1的表达部位以及生物学功能进行了如下研究:
首先利用半定量RT-PCR的方法对拟南芥不同器官中AtKP1的表达进行了分析,结果显示,拟南芥动蛋白异型体AtKP1是一个在幼嫩器官广泛表达的基因。为了解AtKP1在体内的具体表达活性,克隆了AtKP1启动子区域,PLACE在线软件分析表明该区域具有TATAbox和CAATbox等基本元件,同时还具有生长素反应元件;将该启动子区域与gus基因融合(prokp1-gus),转入拟南芥后对转基因植株进行了GUS活性分析。
对转prokp1-gus拟南芥植株进行逆境和生长素处理(10μMABA,1mMIAA,300mMNaCl),结果显示,AtKP1基因的表达响应IAA的诱导,但对ABA和高盐处理没有明显反应;通过RT-PCR研究表明,野生型体内AtKP1基因在IAA诱导48h表达量才增加,说明AtKP1是响应IAA反应的晚期基因。为了进一步了解AtKP1基因的功能,通过PCR、Southernblotting和Northernblotting鉴定,筛选出拟南芥AtKP1T-DNA插入突变纯合体。
KatD是一个和AtKP1高度同源的拟南芥动蛋白异型体。为了解AtKP1的功能是否被KatD替代,克隆了KatD的启动子区域,用gus作为报告基因,对KatD的表达进行了分析。
鉴定、筛选出拟南芥KatD的T-DNA插入突变体,表型观察结果显示,KatD的突变不影响植株的正常生长、发育,表明KatD基因的功能也可被其它基因所替代。将KatD与AtKP1突变体进行杂交,通过PCR、半定量RT-PCR的鉴定获得了双突变纯合体。对T2代双突变体植株表型初步观察显示,植株有明显矮化现象,但维管束和叶毛的发育基本正常。
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