富血小板血浆复合自体浓缩红骨髓促进骨缺损愈合的实验研究

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背景和目的促进骨缺损的愈合一直是骨科学研究的重要课题之一,富血小板血浆是自体全血经过离心得到的血小板浓缩物,其血小板浓度至少为全血中血小板浓度的4倍以上。富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)中含有高浓度的多种生长因子如:血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)、转化生长因子-β1、β2 (transforming growth factor-β1、β2, TGF-β1、β2)、类胰岛素生长因子(insulin-like growth factor, IGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、上皮细胞生长因子(epithelial cell growth factor, ECGF)等。一些学者发现富血小板血浆具有相当明确的促进软组织修复和加速骨愈合的能力。红骨髓中富含多种生长因子、骨形态生成蛋白、骨髓基质细胞、骨内膜细胞、诱导性骨祖细胞(Induced Osteoprogenitor Cell, IOPC)和定向性骨祖细胞(Determined Osteoprogenitor Cell, DOPC),是优秀的促进骨愈合的移植组织。本实验以兔桡骨骨缺损为模型,观察富血小板血浆与自体浓缩红骨髓复合对骨缺损修复的影响,从而为临床治疗骨缺损提供新的思路和方法。方法将健康新西兰大白兔72只随机分为A、B、C、D四组(每组18只),建立双侧桡骨骨缺损模型;采用改良Curasan法制作PRP;无菌条件下以16G骨穿针穿刺髂骨,用预先肝素湿化的注射器抽取1ml骨髓,置于离心管中以1000r/min离心10min,抽取底层约0.2ml浓缩红骨髓备用;以抑肽酶溶液溶解纤维蛋白胶(80mg/ml),加入自体PRP或/和RBM,使用时加入催化剂溶液(由1ml10%CaCl2和1000U凝血酶混合而成),约20秒即呈凝胶状。A组植入PRP+RBM+FG,B组植入PRP+FG,C组植入RBM+FG,D组为空白组,不作处理。分别于术后第4、8、12周通过大体观察、X线检查、组织学观察及影像学评分等方法观察骨缺损修复情况。结果术后4周时:A组骨缺损区大量纤维骨痂形成,较B、C组多,D组骨缺损区为纤维组织填充。X线检查显示A组骨缺损处为斑片状阻射阴影形成,B、C组为连续性絮状阻射影,D组骨缺损处呈透光影,断端可见少许絮状阴影。影像学评分A组高于B、C、D组(P<0.05)。术后8周时:A组骨缺损处为连续性骨痂呈膨胀型生长,骨折线消失,B、C组骨缺损处为硬质骨痂填充,D组骨缺损处两断端有少量骨痂形成。X线检查显示A组两断端模糊,骨缺损处为连续性呈膨胀型高密度影,B、C组骨缺损区为连续性高密度阻射影,两断端模糊,D组骨缺损清晰。影像学评分A组高于B、C、D组(P<0.05)。术后12周时:A组骨缺损处骨形态良好,外观类似正常骨,B、C组骨缺损处为硬质骨痂填充,直径大于正常桡骨,D组缺损处为纤维组织填充,两断端硬化。X线检查显示A组骨缺损消失,桡骨骨皮质连续,髓腔贯通,B组骨缺损呈膨胀型连续性高密度阻射影,髓腔部分再通,C组骨缺损处呈均匀一致的高密度影,桡骨两侧骨皮质连续,髓腔部分再通,D组骨缺损处呈清晰的透亮影,两断端硬化。影像学评分A组高于B、C、D组(P<0.05)结论PRP复合RBM以FG为载体植入兔桡骨骨缺损区,具有明显促进骨缺损愈合的作用。
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