【摘 要】
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目的:研究CCL19对人大肠癌细胞增殖的影响方法:构建慢病毒LV5-CCL19转染肠癌细胞株,获得过表达CCL19肠癌细胞株SW1116-CCL19和SW480-CCL19。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、流式细
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目的:研究CCL19对人大肠癌细胞增殖的影响方法:构建慢病毒LV5-CCL19转染肠癌细胞株,获得过表达CCL19肠癌细胞株SW1116-CCL19和SW480-CCL19。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、流式细胞技术、软琼脂克隆形成试验,小鼠体内成瘤实验,分别检测上调CCL19后对SW1116及SW480细胞增殖、细胞周期的影响。免疫印迹检测细胞内以及胞浆内,胞核内β-catenin、cyclinD1表达。免疫组化检测临床标本中CCL19与β-catenin表达关系。结果:实时定量PCR及免疫印迹法验证LV5-EF1a-Puro-CCL19慢病毒载体系统稳定上调大肠癌细胞株SW1116及SW480的CCL19表达。增殖实验,软琼脂克隆形成实验提示CCL19高表达后肿瘤细胞增殖能力相比阴性对照组及空白对照组受到抑制。流式细胞周期及凋亡检测显示上调CCL19后,将大肠癌细胞阻滞于G1期,抑制肿瘤细胞增殖。凋亡检测结果显示,上调CCL19后,肿瘤细胞凋亡相比阴性对照增加。免疫印迹结果表明,CCL19过表达后细胞内总β-catenin表达量下降。细胞胞浆内β-catenin表达量无明显变化,胞核内β-catenin表达量相比阴性对照组明显下降。裸鼠体内成瘤实验结果显示,上调CCL19后,肿瘤生长较阴性对照组受到抑制。临床标本结果显示,CCL19表达与β-catenin成负相关关系,CCL19高表达的病人相比CCL19低表达的病人肿瘤更小,浸润层次更浅。结论:我们的研究证实,CCL19在大肠癌的增殖中起着抑制作用。
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