家蝇抗菌肽具有理化性质稳定、抗菌谱广、特异性强等特点,在当前许多抗生素产生抗药性、开发新型抗生素困难的形势下,对家蝇抗菌肽的研究在农业、医药、食品等领域具有重要的科学意义。由于抗菌肽在家蝇的正常组织中含量很少,分离纯化难度较大,而化学合成的成本又十分昂贵,因此通过基因工程技术来获得抗菌肽成为首选方法。 本文利用大肠杆菌侵染家蝇三日龄幼虫,通过提取其总RNA,以cDNA为模板,扩增cecropin基因的带有信号肽的序列,将其克隆到pMD18-T载体上,经序列测定与GenBank中的cecropin基因一致,成功获得含有信号肽的开放阅读框（ORF为192bp）的pMD18-T-C。该载体为进一步将家蝇cecropin基因在不同的表达系统中表达奠定基础。 采取了Bac to Bac表达系统,对cecropin基因进行重组表达,该系统具有高效表达、翻译后修饰、无内毒素污染等优势。将cecropin基因克隆至杆状病毒转移载体pFastBacHTA,将重组质粒pFastBacHTA-cec转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,发生体内重组,获得杆粒Bacmid-cec。杆粒DNA在脂质体Lipofectin介导下侵染粉纹夜蛾Trichoplusia ni细胞（Tn-581-4）,获得含cec基因的重组杆状病毒,重组病毒感染Tn细胞后,表达目的蛋白。SDS-PAGE分析和Western blot显示,目的蛋白成功表达。 将cecropin基因亚克隆到果蝇的转座子载体P-因子,在脂质体Lipofectin介导作用下,将P-C-N和含有转座酶的Hepler转入果蝇S2细胞,进行瞬时表达,通过细胞RT-PCR的方法检测表明cecropin基因能够在果蝇S2细胞中表达,这一结果作为在转基因果蝇中表达cecropin基因的体外检测,同时确定了G418对S2细胞的最佳筛选浓度850μg/ml,为果蝇的S2细胞稳定表达家蝇cecropin基因提供依据。