胸腺素α1（Thymosin α1，Tα1）是一种酸性多肽，含有28个氨基酸，不含蛋氨酸、半胱氨酸和芳香氨基酸，无二硫键及糖基化，唯一的修饰是N端乙酰化。采用独特的大肠杆菌分泌型表达技术，将含有人Tα1基因的重组质粒转入大肠杆菌，使表达产物直接分泌至细菌的细胞间质中，因此下游纯化工作简单，产品成本较低。以大肠杆菌表达的Tα1，与天然的Tα1具有相同的氨基酸组成，唯一不同的是N端缺少乙酰化修饰。而在1998年，美国科学家采用多种方法对Tα1体外生物学活性进行了研究和比较，结果表明N端有无乙酰化修饰，对Tα1生物活性影响不显著。为了实现Tα1的高效表达，首先要成功地构建基因工程表达质粒PSTⅡ-Tα1。用PSTⅡ作为起始质粒，其结构包括碱性磷酸酶启动子（PhoA promoter），翻译增强子序列，Shine-Dalgano序列，STⅡ序列，Amp及Tet抗性基因，复制起点。合成Tα1目的基因后，将其克隆入PST Ⅱ的启动子下游。Tα1的cDNA序列采用化学法分步合成，先合成4个两两互补的寡核苷酸片段，将其互补配对后，两端会分别形成Hind Ⅲ和Sph I核酸内切酶位点的粘性末端。然后利用双酶切法构建重组质粒，经连接、转化、鉴定、筛选等步骤后，最终获得带有目的基因片段的重组质粒PSTⅡ- Tα1。该质粒经双酶切鉴定、目的基因序列分析，证实了重组质粒结构的正确性。重组质粒获得后，选择合适的表达工程菌进行外源基因的表达至关重要，基因正确表达后才能最终获得需要的产品Tα1。采<WP=54>用氯化钙法制备新鲜的大肠杆菌（受体菌，W3110）感受态细胞，将鉴定正确的基因重组质粒pTα1转化入感受态W3110菌中，涂板培养后获得表达工程菌株pTα1 /W3110。将转化后的菌株扩大培养后提质粒，进行双酶切鉴定，结果完全正确。对工程菌pTα1/W3110 进行了诱导表达实验，用SDS－PAGE法筛选出了表达量相对较高的工程菌菌株，建立了原始种子库，并对表达产物进行了一系列的鉴定。在SDS-PAGE电泳鉴定实验中，表达产物与空白菌的全菌蛋白对照相比，在分子量为3000左右出现了一条新的蛋白带，与对照品日达仙电泳带位置基本一致，证明有基因重组的Tα1表达产物；经质谱鉴定，表达产物分子量为3066，与Tα1的理论分子量一致；经氨基酸全序列分析，证明表达产物的氨基酸序列完全正确；经“T细胞活性测定法―脱E受体法”测定，证明表达产物具有与化学法合成的胸腺素相类似的生物学活性。综上，此次成功地构建了分泌型表达工程菌pTα1/W3110，该菌株可以高效地表达单一的蛋白产品Tα1。该工程菌株的成功构建，为该产品的下游纯化工作，以及最终获得高纯度、高活性的Tα1产品奠定了良好的基础。