目的探讨不同类型糖尿病患者外周血FOXP3+调节性T细胞数量的差异及其临床意义。方法研究分为1型糖尿病组（n=43例），2型糖尿病组（n=16例）和健康对照组（n=19例）。采用放射配体法检测胰岛自身抗体ZnT8A、GADA和ICA。采用细胞膜打孔和三色荧光标记流式细胞术检测外周血CD4⁺T的细胞群中CD4⁺CD25⁺FOXP3+T细胞所占百分比、CD4⁺CD25⁺T细胞所占百分比。结果①1型糖尿病患者和2型糖尿病患者的外周血中CD4⁺CD25⁺T细胞占CD4⁺T淋巴细胞的百分比均低于健康志愿者，差异有统计学意义（P<0.05）。②1型糖尿病患者的外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3+T细胞占CD4⁺T淋巴细胞的百分比低于健康志愿者和2型糖尿病患者，差异有统计学意义（P<0.05）。③1型糖尿病患者的病程与外周血CD4⁺CD25⁺FOXP3+T细胞数量、CD4⁺CD25⁺T细胞数量均无相关性。结论1型糖尿病患者外周血FOXP3+调节性T细胞数量下降，FOXP3+调节性T细胞数量的下降程度与病程无关。2型糖尿病患者外周血FOXP3+调节性T细胞数量无异常。FOXP3+是调节性T细胞的特征性标志。目的建立人外周血CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞体外分选技术，探讨分选的CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞用于调节性T细胞体外扩增的可行性。方法采用Ficoll密度梯度离心法从1U粒细胞中获取外周血单核淋巴细胞（Peripheral blood mononuclear cells, PBMC）。利用免疫磁珠分选法从PBMC中分选CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞。采用细胞膜打孔和三色荧光标记流式细胞术检测分选的细胞表面标志和FOXP3阳性率。采用RT-PCR检测CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞内FOXP3mRNA表达量。结果①经免疫磁珠法分选的CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞纯度为（87.4士2.6）%，其中FOXP3阳性率（85.6士4.2）%；②CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞内FOXP3mRNA表达水平显著高于PBMC和CD4-CD127highT细胞，差异有统计学意义（P<0.05）。结论免疫磁珠两步法可以高效的从外周血中分选出CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞。CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞群高表达FOXP3，是体外扩增Tregs的可靠细胞来源。目的建立CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞体外扩增体系，探讨影响CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞体外扩增效率和纯度的相关因素。方法将分选获得的CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞按104细胞/100μL/孔接种到96孔板，给予anti-CD3/anti-CD28磁珠刺激，根据不同培养条件加入IL-2、和/或rapamycin，于不同的体外扩增周期收获CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞。采用Annexin V和PI荧光标记流式细胞术检测扩增后获得的Tregs的调亡率。采用细胞膜打孔和三色荧光标记流式细胞术检测扩增后获得的Tregs的纯度。采用混合淋巴细胞培养检测扩增后Tregs免疫抑制功能。结果①磁珠分选后，使用anti-CD3/anti-CD28磁珠联合1000U/ml IL-2刺激CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞增殖，Tregs数目在培养第1周扩增（67±5）倍，第2周扩增（20±3）倍。②经过第1周的体外扩增后，Tregs的调亡率为（14.2±2.1）%，其中（10.5±1.2）%为晚期凋亡；经过第2周的体外扩增后，T细胞的调亡率为（16.6±3.2）%，其中（10.6±2.3）%为晚期凋亡；经过第3周的体外扩增后，Tregs的调亡率为27.4%，其中26.9%为晚期凋亡。③经过2周的体外扩增， Tregs纯度由（87.4士2.6）%下降到（65.1±4.0）%，但是CD4⁺CD25⁺T细胞比例仍接近90%。④混合淋巴细胞培养实验显示体外扩增的Tregs对同种异体效应T细胞的增殖有明显的抑制作用。结论qanti-CD3/anti-CD28磁珠联合1000U/ml的IL-2可以在体外高效扩增人外周血Tregs，合适的扩增时间是2周。扩增的Tregs仍具有免疫抑制性。成功建立了CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-TT细胞体外扩增体系，为Tregs的临床应用奠定了基础。