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研究背景糖尿病是慢性肾脏病最常见的潜在病因[1],糖尿病肾病（DN）是终末期肾病（ESRD）的主要病因之一,其发病机制与多种因素密切相关[2]。几乎所有的肾小球疾病都与足细胞损伤有关[3],研究报道[4],糖尿病肾病患者的足细胞数目减少与患者蛋白尿的发生密切相关。因此,研究足细胞在糖尿病肾病疾病发展过程中所起的作用,具有重大意义。鸟苷酸交换因子Sos（Son of sevenless）是一种Ras、Rac激活剂[5],可引起GTP/GDP交换。它的两个同源体Sos1和Sos2普遍参与许多信号通路的调控,在肾脏病研究领域,已知Sos2蛋白在人类肾脏肾小球和肾小管中有表达[6]。目前Sos2在肾脏足细胞中的研究尚未有报道,此外,CaN-NFAT信号通路在肾小球疾病发病机制中具有核心地位,因此我们致力于研究Sos2是否通过参与CaN-NFAT信号通路,影响足细胞结构和功能,进而对糖尿病肾病进行基础机制调节。研究目的本研究首先观察Sos2在肾脏足细胞中的表达情况,检测Sos2对足细胞的损伤、活动性等方面的影响,最后探索Sos2是通过何种机制作用于糖尿病肾病,并对其产生影响。研究方法1.本研究选取人类肾穿组织,通过免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察Sos2在糖尿病肾病患者足细胞中的表达;2.体外培养永生化小鼠足细胞,以高糖（30mmol/L葡萄糖）刺激足细胞48h,同时设置正常对照组和甘露醇对照组,采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测高糖刺激下足细胞Sos2的mRNA及蛋白表达;3.采用Western blot实验、免疫荧光、划痕实验和Transwell实验检测Sos2过表达及沉默后Podocin的表达、足细胞活动性及NFATc1的入核情况;4.采用RT-PCR检测NFATc1下游目的基因转录情况;5.利用免疫共沉淀观察Sos2与TRPC6之间的相互关系,并采用Western blot观察Sos2对TRPC6表达量的调控。研究结果1.与正常人肾组织对比,Sos2在糖尿病肾病患者的足细胞中表达明显降低;2.与正常对照组及甘露醇对照组相比,Sos2在高糖刺激体外培养的足细胞中表达显著降低（p<0.05）;3.沉默Sos2后,足细胞标记蛋白Podocin的表达显著降低,足细胞活动性增加,NFATc1入核增加,NFATc1下游目的基因转录增加（p<0.05）;4.与之相反,高糖刺激下过表达Sos2后,Podocin的表达显著增高,足细胞的活动性降低,NFATc1入核减少,NFATc1下游目的基因转录降低（p<0.05）;5.免疫共沉淀结果显示,Sos2与TRPC6有蛋白结合,且Sos2可抑制TRPC6的表达。研究结论Sos2可在足细胞中表达,且高糖条件下,Sos2在足细胞中的表达明显下降。Sos2是糖尿病肾病足细胞的一个保护因子,可能通过与TRPC6结合,减少TRPC6的表达,参与CaN-NFAT信号通路,从而抑制NFATc1的入核减轻糖尿病肾病足细胞损伤。