高胆固醇血症(hypercholesterolaemia)是动脉粥样硬化(atherosclerosis)和冠心病(coronary heart disease，CHD)发生发展的主要因素之一。1984年首次证明血浆中胆固醇水平与CHD的危险性有关。抑制胆固醇的生物合成是降低血浆胆固醇水平的重要手段。 他汀类药物(HMG-CoA还原酶抑制剂)是目前应用最广泛的降胆固醇药物，可有效地降低心血管疾病的发病率及死亡率。尽管他汀类药物在临床应用中显示了良好的安全性，但是由于HMG-CoA还原酶处于甲羟戊酸途径的上游位置，他汀类药物不仅抑制了胆固醇的合成，同时也是抑制了其他非甾体类异戊二烯物质(如长萜醇、泛醌、异戊烯基tRNA和异戊二烯基蛋白质等)的合成，因此选择性抑制胆固醇生物合成也成为了未来降胆固醇药物开发的一个理想方向。鲨烯合成酶(squalene synthase，farnesyl-diphosphate farnesyltransferase，SQS，EC2.5.1.21)处于胆固醇合成支路，抑制该酶可以有效地降低血清胆固醇的水平，而不会影响其他非甾体类异戊二烯的合成，因此SQS也成为近年来降胆固醇药物非常具有潜力的靶点。 本文利用RT-PCR技术成功克隆了HepG2细胞SQS基因(FDFT1)CDS的核心片段(tFDFT1)，通过测序证实，克隆序列编码的氨基酸片段与报道的SQS的相应区域(tSQS)相同，继而将该片段构建剑原核表达载体pET28a(+)上在E.coli BL21(DE3)中融合表达，并用Ni2+-Sepharose亲和柱对蛋白进行纯化。根据NADPH的消耗在鲨烯合成酶催化反应中与鲨烯的形成成化学计量关系这一特点，在340/380nm处双波长测定NADPH吸收值减少，间接测定重组tSQS的活性。另外，为了大量制备重组tSQS，在3L发酵罐中进行了重组菌的高密度发酵，比较了发酵培养基成份、诱导时间、不同碳源等因素对菌体生长及重组tSQS表达量的影响。结果显示重组FDFT1基因的阳性克隆获得成功，分离纯化的重组蛋白大小同符合预期大小(约41KDa)，纯度达99％：建立了基于紫外分光光度法的SQS酶活性定性测定方法，重组tSQS蛋白具有较好的催化FPP形成鲨烯的活性；当采用改良的复合M9培养基，用甘油作为碳源，25℃诱导5个小时，批次发酵OD值达2.180，重组tSQS表达水平可达30.24％。这些结果为SQS蛋白的重组制备，SQS抑制剂高通量筛选模型的建立和筛选基于抑制鲨烯合成酶的新型降胆固醇药物奠定基础。