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目的:观察田七注射液对阿霉素(ADR)肾纤维化大鼠肾脏Smad转录共抑制因子(SnoN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad6蛋白表达的影响,探讨田七注射液抗肾纤维化的作用机制。
方法:清洁级SD雄性大鼠80只,随机分为4组:正常组(n=20),对照组(n=20),模型组(n=20),田七注射液治疗组(以下简称田七组)(n=20)。通过切除大鼠右肾,术后第7天及第30天分别尾静脉注射ADR5mg/kg、3mg/kg建立ADR肾纤维化大鼠模型,对照组仅切除右肾,不注射ADR,予生理盐水(1.5ml/100g·d)腹腔注射;模型组造模后予生理盐水(1.5ml/100g·d)腹腔注射;田七组造模后予田七注射液(1.5ml/100g·d)腹腔注射给药;正常组不予任何处理。每周测大鼠体重,隔周收集大鼠24h尿量,测24h尿蛋白定量。连续给药56天后处死大鼠,处死前收集腹主动脉血和肾组织标本。全自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr),观察肾功能变化。取各组大鼠肾组织行苏木素伊红染色(HE)和马松染色(Masson),光镜下观察肾脏病理变化;免疫组化检测肾组织中SnoN、TGF-β1、Smad3、Smad6蛋白的表达,Westernblot检测SnoN蛋白的表达水平。
结果:
(1)各组大鼠一般情况:与正常组和对照组大鼠相比,模型组大鼠活力明显减退,精神萎靡,体重下降,摄食和饮水量减少,蜷缩成团,脱毛明显,并出现腹水等症状,田七组大鼠上述情况较模型组明显改善。
(2)各组大鼠24小时尿蛋白定量结果:模型组尿蛋白排泄量显著高于正常组(P<0.01);与模型组相比,田七组尿蛋白排泄量均明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。
(3)各组大鼠生化检测结果:模型组大鼠的BUN、Scr均显著高于正常组(P<0.01);与模型组相比,田七组BUN、Scr有所降低(P<0.05)。
(4)各组大鼠肾脏外观及病理结果:正常组和对照组大鼠肾脏外观正常,光镜下可见正常结构肾小球和肾小管,与正常组相比,模型组大鼠肾脏肿大,颜色苍白,质地变硬。肾脏剖面,模型组的肾脏整体呈缺血状,以肾皮质为重,颜色暗红,质地粗糙变硬,部分有囊肿和瘢痕形成。光镜下肾小球系膜细胞增生,肾小球系膜区增宽,球囊壁黏连;部分肾小球有新月体形成,出现局灶硬化;病变肾小球周围的近曲小管上皮细胞肿胀,肾小管萎缩,肾小管腔内可见蛋白管型;肾间质炎性细胞浸润,肾间质纤维化;。而田七组的肾脏病理改变明显轻于模型组;与模型组比较,田七组肾小球硬化指数及肾间质损伤分数明显降低(P<0.01)。
(5)各组大鼠肾组织免疫组化检测结果:与正常组比较,模型组SnoN蛋白表达显著下调(P<0.01),TGF-β1、Smad3蛋白表达显著上调(P<0.01),Smad6蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型组比较,田七组肾组织SnoN蛋白表达显著上调(P<0.01),TGF-β1、Smad3蛋白表达显著下调(P<0.01),Smad6蛋白表达显著上调(P<0.01)。
(6)各组大鼠肾组织Westernblot检测结果:与正常组比较,模型组肾组织SnoN蛋白表达显著减少(P<0.01);与模型组比较,田七组肾组织SnoN蛋白表达明显增加(P<0.01)。
结论:
(1)田七注射液可以降低ADR肾纤维化大鼠BUN、Scr水平,减少尿蛋白,改善肾脏病理损伤,对肾脏有保护作用
(2)田七注射液可能是通过上调SnoN、Smad6蛋白,下调TGF-β1、Smad3蛋白的表达,抑制TGF-β1/Smads信号转导通路的活化,从而发挥抗肾纤维化的作用。