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目的:观察慢性海洛因给药后SD大鼠海马DOR和MOR的表达,及给药过程中DOR与CREB磷酸化的相互关系;外转Myc-DOR、MOR-Flag到HEK293细胞,急性海洛因处理DOR、MOR及CREB磷酸化的表达变化。
方法:大鼠持续给药10天,每天给药两次。实验大鼠分为6组:Saline(NS)组:腹腔给予生理盐水0.2 ml;Heroin组:腹腔给予海洛因10 mg/kg:Naloxone+NS组:先腹腔给予Naloxone20mg/kg,30 min后皮下给予生理盐水0.2 ml;Naloxone+Heroin组:先腹腔给予Naloxone20 mg/kg,30 min后腹腔给予海洛因10 mg/kg;Naltrexone+NS组:先腹腔给予Naltrexone20 mg/kg,30 min后皮下给予生理盐水0.2 ml一次;Naltrexone+Heroin组:先腹腔给予Naltrexone20 mg/kg,30 min后腹腔给予海洛因10 mg/kg。实验大鼠在最后一天注射1小时后取材检测。通过免疫组化、蛋白印迹、RT-PCR等技术,检测DOR、MOR及pCREB的表达。外源转染MOR-Flag、Myc-DOR、Mutation Myc-DOR到HEK293细胞,通过免疫蛋白印迹检测海洛因刺激10 min DOR和MOR的磷酸化水平、刺激30 min后HEK293细胞中pCREB的变化。
结果:
(1)慢性海洛因给药大鼠海马DOR、MOR在表达降低,CREB蛋白磷酸化增多
(2)MOR特异性抑制剂纳洛酮预处理,部分抑制慢性海洛因给药引起的CREB蛋白磷酸化增加
(3)DOR特异性抑制剂纳曲酮预处理,部分抑制慢性海洛因给药引起的CREB蛋白磷酸化增加
(4)海洛因急性处理HEK293细胞DOR、MOR磷酸化水平增高,CREB磷酸化水平增高,突变的DOR没有任何变化
结论:实验结果显示,大鼠海马DOR与MOR都是海洛因的受体,在海洛因引起的CREB磷酸化增强的信号通路中起了重要的作用。海洛因慢性处理海马DOR与MOR表达降低。海洛因能刺激DOR、MOR引起细胞下游信号分子CREB磷酸化增强。