【摘 要】
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第一部分 αl-B糖蛋白前体基因的原核表达及功能鉴定 前言 人类基因组计划已经初步完成,对人类功能基因的探索将是我们研究领域中的艰难任务。α1-B糖蛋白于1986年由Is
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第一部分 αl-B糖蛋白前体基因的原核表达及功能鉴定 前言 人类基因组计划已经初步完成,对人类功能基因的探索将是我们研究领域中的艰难任务。α1-B糖蛋白于1986年由Ishioka等人首次从人血浆中分离,2001年本研究组从人胎肝cDNA文库中克隆了人α1-B糖蛋白前体基因,为研究此蛋白功能提供了方便路径。在我们的前期研究中,通过对此基因表达谱及表达调控的研究,推测α1-B糖蛋白可以参与肝再生的进程,促进肝细胞增殖。在进一步研究中,由于从血浆中分离纯化α1-B糖蛋白很困难,利用毕赤酵母表达系统尚未获得α1-B糖蛋白的高效表达,所以利用DNA重组技术,使α1-B糖蛋白在原核细胞中表达,用复性后重组α1-B糖蛋白处理细胞,结合流式细胞仪及MTT方法,观察对细胞增殖的影响。同时,重组α1-B糖蛋白为制备α1-B糖蛋白抗体,获得下游蛋白,及研究蛋白质间的相互作用奠定了基础。 实验材料与方法 PCR扩增α1-B糖蛋白前体基因,构建重组原核表达载体pET28-a(+)-α1-B,转化宿主菌BL21(DE3);诱导表达α1-B糖蛋白,将包涵体蛋白提取、纯化和复性后,做Western印迹鉴定;流式细胞仪和MTT检测分析重组α1-B糖蛋白对细胞增殖的影响。 实验结果 构建的重组原核表达载体pET28-a(+)-α1-B经NheI,EcoRI双酶切,证实已连接上目的基因,测序结果显示基因编码正确;确定诱导温度为
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