石榴皮提取物的化感抑藻效果研究

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本文以石榴皮为原材料,研究了其提取物对铜绿微囊藻的抑制效果。试验从直接投加石榴皮出发,研究其对铜绿微囊藻的抑制效果,然后通过不同的提取方式制备石榴皮提取物,探索石榴皮提取物在不同条件下对铜绿微囊藻的抑制作用以及其对不同藻种的抑制效果;其次,以铜绿微囊藻为主要对象,研究了石榴皮提取物对其生理生化的影响;最后,本文还对石榴皮粗提取物进行了初步分离和鉴定,以探索石榴皮提取物的主要抑藻成分。研究获得的主要结论如下:(1)直接投加石榴皮粉末可以抑制铜绿微囊藻的生长,2g/L的投加量就能使藻密度从5×105个/ml下降到1.77×105个/ml;当投加量大于6g/L时,就能完全抑制藻的生长。采用不同提取方式来获得石榴皮提取物,结果发现,超声波提取和振荡提取对提取物产率影响不大,而甲醇、丙酮和石油醚的提取效果不同,甲醇提取物产率分别为54.28%和55.79%,丙酮提取物产率分别为3.63%和3.64%,石油醚提取物产率分别为1.17%和1.29%,6种提取物对铜绿微囊藻均有抑制作用,在8天内,振荡条件下获得的石油醚提取物对铜绿微囊藻相对抑制率在9%至36%之间,其它5种提取物对铜绿微囊藻的相对抑制率均达到99%以上。(2)石榴皮提取物在不同pH条件下对铜绿微囊藻均有抑制效果,且抑制效果与pH呈负相关。pH=7.5和pH=8条件下的抑藻效果相当,随着时间延长,10mg/L、20mg/L和30mg/L提取物的相对抑藻率分别维持在17%、67%和76%以上,而在pH=8.5和pH=9条件下,随着时间延长,不同浓度提取物最终对铜绿微囊藻的相对抑制率分别在7%、67%和71%以下。在5个不同营养盐水平(总氮>1mg/L,总磷>0.03mg/L)的水质条件下,提取物均能有效抑制铜绿微囊藻的生长,当提取物浓度大于20mg/L时,其对铜绿微囊藻的相对抑制率几乎都能维持在50%以上。对不同藻种的抑制结果发现,当提取物浓度大于30mg/L时,其对铜绿微囊藻的相对抑制率能达到90%以上,而对四尾栅藻的相对抑制率最大仅达到了64.68%。(3)5~30mg/L提取物对藻细胞内叶绿素a含量产生了一定的抑制作用,在试验第2天,对照组的叶绿素a含量分别是各试验组的1.07、1.28、1.10、1.15、1.01、1.18倍,而试验第8天时,对照组叶绿素a含量分别是各试验组的1.26、1.29、1.70、1.70、1.46、1.24倍。石榴皮提取物在试验期间对铜绿微囊藻的细胞活性产生了抑制作用,具体表现在,当提取物浓度为25mg/L时,活体藻细胞通过脱氢酶转化的TF(1,3,5-三苯几甲臜)含量仅为对照组的0.75、0.15、0.07、0.26倍,而当提取物浓度达到30mg/L时,试验组TF含量仅为对照组的0.72、0.14、0.06、0.1倍。25和30mg/L的提取物对铜绿微囊藻抗氧化系统产生了较强的胁迫,藻细胞内MDA(丙二醛)含量最大分别达到了对照组的3.94和5.90倍,SOD(超氧化物歧化酶)活性最大分别达到了对照组的3.25和4.34倍。(4)通过柱层析分离以及抑藻活性检测,并结合液质分析,初步推测石榴皮中具有抑藻活性的化合物可能为两种多酚类化合物的糖苷,分别为没食子酸己糖苷和鞣花酸己糖苷。
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