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子宫内膜异位症（内异症endometriosis,EMs）在生育年龄妇女的发病率约为10%～15%,在不孕妇女中甚至高达50%以上,且发病率呈逐年上升的趋势。传统的药物和手术等治疗方法存在较大的副作用和较高的复发率,因此寻求新的治疗措施十分重要。本论文通过成功建立子宫内膜异位症Lewis大鼠模型,应用阳离子脂质体介导的内皮抑素（endostatin,ES）重组质粒局部注射法将内皮抑素基因转染至子宫内膜异位症大鼠模型,判断转染是否成功,并于转染后两周通过观察测定血清内皮抑素及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelialgrowth factor,VEGF）水平的变化,异位病灶（ectopic focus,EF）体积的变化;转染后异位病灶组织内皮抑素及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的表达以及微血管密度（microvessel density,MVD）各项指标的变化,分析判断内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效,以了解内皮抑素转基因技术应用于子宫内膜异位症治疗的可能及效果。论文将分为子宫内膜异位症大鼠模型的建立,内皮抑素转染子宫内膜异位症大鼠模型以及内皮抑素转染子宫内膜异位症大鼠模型的疗效观察三部分对相关内容进行阐述。第一部分子宫内膜异位症大鼠模型的建立目的:用自体子宫内膜移植法构建子宫内膜异位症Lewis大鼠模型,为进一步的实验奠定基础。方法:85只14周龄健康雌性未孕Lewis大鼠,经阴道涂片观察动情周期,在大鼠的动情期采用自体子宫内膜移植法构建子宫内膜异位症模型,手术4周后第二次开腹,用游标卡尺测量异位病灶长、宽,计算病灶体积;通过肉眼大体观察判断建模成功与否。选择成模的大鼠作为下一步实验的对象,并在第二部分实验后第三次开腹时,通过异位病灶病理组织学检查进一步确认建模的成功;通过体积变化观察病灶生长的情况。结果:1.Lewis大鼠的动情周期为4-5天,85只大鼠均有连续的动情周期,阴道涂片观察动情周期的主要变化为动情前期见大量是有核上皮细胞,偶有少量的角化细胞;动情期主要是无核角化细胞;动情后期为大量多型核的白细胞;动情间期是白细胞和少量的上皮细胞。2.自体子宫内膜移植法构建Lewis大鼠子宫内膜异位症模型,术后4周85只大鼠中有64只见移植物体积增大,内部有液体积聚,表面有血管形成,呈隆起透亮的小囊状,质软,病理组织学检查见囊内壁有子宫内膜腺体组织及间质细胞生长,视为建模成功;成功率为75.29%;11只为异位病灶不生长萎缩变小,8只为炎性坏死囊肿,呈浑浊黄白色结节状,切开囊肿成黄色膏脂样物,2只死亡。3.成模大鼠异位病灶的体积在两对照组术后6周显著大于术后4周（P＜0.01）。结论:自体子宫内膜移植法建立Lewis大鼠子宫内膜异位症模型具有可行性和可重复性,是较理想的动物模型。第二部分内皮抑素转染子宫内膜异位症大鼠模型目的:应用阳离子脂质体介导的内皮抑素重组质粒局部注射法将内皮抑素基因转染至子宫内膜异位症大鼠模型体内,判断转染是否成功,以了解内皮抑素转基因技术应用于子宫内膜异位症治疗的可能,并为第三部分的疗效观察打下基础。方法:选择建模成功的64只大鼠作为本部分实验的研究对象,随机分为ES转染组（Ⅰ组）24只、载体对照组（Ⅱ组）20只和阴性对照组（Ⅲ组）20只。ES转染组大鼠用10μl微量注射器一次性异位病灶内注射lipofectamine-endo-pBud复合物2μl进行内皮抑素基因转染,载体对照组大鼠同法注射载体脂质体lipofectamine-pBud复合物2μl,阴性对照组同法注射磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution,PBS）2μl进行对照。转染后2周第三次开腹,每组大鼠再各随机均分为两个亚组,即Ⅰ组分为Ⅰa组（12只）和Ⅰb组（12只）,Ⅱ组分为Ⅱa组（10只）和Ⅱb组（10只）,Ⅲ组分为Ⅲa组（10只）和Ⅲb组（10只）。取Ⅰa、Ⅱa与Ⅲa 3小组异位病灶组织通过实时荧光定量PCR法检测内皮抑素基因的相对表达量,用Western-blot对内皮抑素蛋白的相对表达量进行测定,同时Ⅰa组的异位病灶组织用Western-blot对ES-HA融合蛋白进行测定,均用来判断转染成功与否。结果:1.采用阳离子脂质体Lipofectamine TM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射的方法进行大鼠内皮抑素基因转染,注射相应试剂后2周,实时荧光定量PCR法检测到转染组异位病灶组织中ES基因的相对表达高于载体对照组和阴性对照组（P＜0.05）,而载体对照组与阴性对照组之间比较无统计学差异（P＞0.05）;2.采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射的方法进行大鼠内皮抑素基因转染,注射相应试剂后2周,Western-blot的结果示ES转染组异位病灶组织有ES-HA融合蛋白表达,且ES蛋白的相对表达量ES转染组显著高于载体对照组和阴性对照组（P＜0.01）,而载体对照组与阴性对照组之间比较无统计学差异（P＞0.05）。结论:阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射法可以成功实现ES在子宫内膜异位症大鼠异位内膜中的表达。第三部分内皮抑素转染子宫内膜异位症大鼠模型的疗效观察目的:通过测定分析内皮抑素转染子宫内膜异位症大鼠模型前后各组大鼠血清内皮抑素及血管内皮细胞生长因子水平的变化,异位病灶体积的变化;转染后异位病灶组织内皮抑素及基质金属蛋白酶-2的表达以及微血管密度各项指标的变化,观察了解内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。方法:在第二部分实验分组的基础之上,实验中Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组所有的64只大鼠模型在转染前后均经尾静脉取血,用ELISA法对大鼠血清中内皮抑素及血管内皮细胞生长因子的水平进行测定;用游标卡尺对转染前后各组大鼠异位病灶的长、宽进行测量,计算体积;取Ⅰb、Ⅱb与Ⅲb 3小组异位病灶组织经固定、包埋、连续切片后用免疫组化SP法对内皮抑素、基质金属蛋白酶-2以及微血管密度的表达进行测定。结果:1.ELISA法测定子宫内膜异位症大鼠模型血清ES及VEGF水平,转染后2周组间比较ES转染组ES水平显著高于两对照组（P＜0.01）,而两对照组之间比较没有统计学差异（P＞0.05）,ES转染组VEGF水平显著低于两对照组（P＜0.01）,而两对照组之间比较没有统计学差异（P＞0.05）;组内比较ES转染组转染后ES水平显著高于转染前（P＜0.01）,ES转染组VEGF水平转染后显著低于转染前（P＜0.01）,而两对照组转染前后ES水平以及VEGF水平比较均无统计学意义（P＞0.05）;且三组大鼠ES与VEGF在血清中的表达水平呈负相关（r=-0.805）。2.免疫组化SP法测定转染后三组异位病灶组织中ES、MMP-2的表达以及MVD,ES转染组ES表达明显增高,与两对照组比较均有显著性差异（P＜0.01）,两对照组之间比较无统计学意义（P＞0.05）;ES转染组MMP-2的表达明显减少,与两对照组比较均有显著性差异（P＜0.01）,两对照组之间比较无统计学意义（P＞0.05）;ES转染组MVD明显减少,与两对照组比较均有显著性差异（P＜0.01）,两对照组之间比较无统计学意义（P＞0.05）;且三组大鼠ES与MMP-2在异位内膜中的表达呈负相关（r=-0.700）。3.测量异位病灶体积大小,转染前三组间异位病灶体积比较均无统计学意义（P＞0.05）;转染后ES转染组异位病灶体积明显缩小,与两对照组比较均有显著性差异（P＜0.01）,两对照组之间比较无统计学意义（P＞0.05）;三组异位病灶体积转染前后的组内比较,三组转染前后体积变化均有显著性差异（P＜0.01）,ES转染组异位病灶体积转染后较转染前明显缩小,两对照组异位病灶体积转染后较转染前明显增大结论:阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的pBudCE4.1 endos重组质粒异位病灶局部直接注射对子宫内膜异位症大鼠模型有治疗作用。