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益生菌是一类通过调控动物肠道微生物区系平衡,能有效地促进宿主动物健康生长的微生物活菌制剂。益生菌株只有黏附和定植在宿主肠上皮细胞上才能有效发挥作用,因此,益生菌的黏附特性及其机理研究成为备受关注的研究热点。目前黏附性研究的模型以肠上皮样细胞Caco-2细胞株、人结肠癌细胞株HT-29、各种原代培养的上皮细胞以及分离纯化的黏液为主,尚未见永生化正常肠上皮细胞为体外模型的研究报道。本研究以永生化猪小肠上皮细胞ZYM- SIEC02作为体外模型,以健康仔猪的粪便和不同肠段肠黏液样品中的乳酸菌为材料,探索乳酸菌的黏附性能、抗逆性以及对病原菌的黏附抑制作用,旨在为揭示益生菌作用机理提供依据。结果如下:1.从健康仔猪不同肠段内容物和黏液中分离筛选出12株乳酸菌,通过对永生化猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02的黏附试验发现,各乳酸菌的黏附性存在显著差异(p < 0.05),6株乳酸菌的黏附性较好,其中Y091231的黏附指数为(2903.25±83.33 )CFU/100细胞,Y091221的黏附指数为(2320.37±81.02 ) CFU/100细胞, Y224031的黏附指数为(1965.43±37.72) CFU/100细胞。总体来看,乳酸菌产酸性越强,黏附性越高。2.对黏附性良好的6株乳酸菌进行抗逆性试验,其中Y091231、Y224031和Y091221对高胆盐、低pH具有较强的耐受性。根据《伯杰氏细菌鉴定手册》和16 S rDNA序列测定,最终确定三株来自回肠黏液或内容物的乳酸菌分别为唾液乳杆菌、粪肠球菌和约氏乳杆菌。3.乳酸菌对肠道致病菌黏附抑制能力试验表明,三株乳酸菌对致病菌均具有很好的黏附抑制作用,但不同乳酸菌对不同致病菌的黏附抑制具有种属特异性,其中Y091231对大肠埃希菌C83921的黏附抑菌能力最强(99.4±3.17)%,Y091221对沙门氏菌的黏附抑制能力最强(97.1±2.04)%,Y091231对金黄色葡萄球菌的CVCC 2258黏附抑制能力最强(98.0±2.31)%。4.不同生长时期的乳酸菌对猪小肠上皮细胞ZYM-SIEC02的黏附能力存在明显差异,培养至稳定期(16h～20h)时的细菌黏附能力最强。