双孢蘑菇(Agaricus bisporus)栽培菌株在长期的繁殖和生产使用中,会由于自身变异和环境因素的影响而产生衰退。因此菌株的提纯复壮对防止生产菌种在长期生产使用中原有优良性能发生变异和生产性能出现衰退是十分必要的。此外,生产中还急需开发出鉴定菌种衰退程度的科学检测方法。本研究以生产中普遍使用的双孢蘑菇栽培菌株As2796作为提纯复壮的出发菌株,利用原生质体再生异核体分离、组织分离、菌丝尖端分离三种方法分离得到若干分离株,经过PDPY平板上的生长速度测定、麦粒种长速测定、粪草料试管中的长速测定、CMC酶相对活力的测定来进行初筛,并将初筛菌株进行栽培出菇试验,考察栽培菌株的农艺性状,包括菌盖直径、菌盖厚度、菌柄直径、菌柄长、单菇重、单位面积产量、栽培种满瓶时间。采用灰色系统关联度分析法并根据栽培管理时期的性状,综合评价复壮菌株的优劣,选取与出发菌株关联度最大的分离菌株确定为提纯复壮菌株。菌株衰退程度与细胞凋亡速率有正相关性,因此选用细胞凋亡速率的检测来反映菌株衰退程度。对经过不同处理得到的8个菌株进行活性氧物质含量检测和染色质片断化检测,以确定不同菌株的凋亡速率。凋亡速率越大,菌株衰退程度愈大。主要研究结果如下:三种分离方法得到的分离株中,吃料能力大于出发菌株As2796的有27株。栽培试验中,根据灰色关联度大小得到20株优于出发菌株的分离株,其中的P2、P28、TI12、Tip8在产量、菇型等方面综合表现最佳。出发菌株的菌盖较薄,菌柄细长,产量为7.406Kg/m~2,与参考菌株(标准菌株)的关联度为0.6230,在所有的初筛菌株中关联序位于第21位。在原生质体再生异核体分离株中P2、P28的综合性状表现优于其他的原生质体分离株。P28不丛生,单菇较重且子实体圆整,产量为8.444Kg/m~2,与参考菌株的关联度为0.8192,在所有的初筛菌株中关联序位于第1位。P2子实体菌盖直径较大,子实体硬实,产量为7.217Kg/m~2,与参考菌株的关联度0.7731,在所有的初筛菌株中关联序位于第2。在组织分离株中TI12综合表现最好,平均单菇重最大,菇型圆整,产量为6.816Kg/m~2,与参考菌株的关联度为0.7277,关联序位于第3位。在菌丝尖端分离株中,Tip8综合表现最好,春季出菇较多,菌柄呈粗短的圆柱形,但是产量不高,仅位于18位,与参考菌株的关联度为0.6685,关联序位于第7位。因此,选取上述4个分离株P2、P28、TI12、Tip8作为本研究得到的提纯复壮菌株。通过活性氧物质含量和染色质片断化两方面的细胞凋亡检测发现,不同处理得到的菌株的衰退程度不同。受到高温刺激的菌株的凋亡速率最大,在粪草料试管4℃保存的菌株的凋亡速率最小。菌丝尖端分离菌株的细胞凋亡速率大于原生质体分离菌株的凋亡速率,大于组织分离菌株的凋亡速率。在4℃斜面长期保存的菌株的凋亡速率大于常温下斜面保存并及时转管的菌株的凋亡速率。综合以上研究结果可以得出,原生质体再生异核体分离、菌丝尖端分离、组织分离均有一定程度的提纯复壮效果,其中原生质体再生异核体分离方法的提纯复壮效果最好。在培养料基质上低温保存菌株效果最好,可降低菌株衰退的速率。