和血生络法对脑缺血再灌注大鼠血管新生的干预作用

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目的:通过动物实验,观察和血生络法对脑缺血再灌注后大鼠脑组织梗死区血管新生的干预情况及该法对缺血局部促血管新生因子VEGF的影响,初步探讨和血生络法是否具有促血管新生作用,并进一步阐明其机制,为临床应用提供实验依据。方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、和血生络方组,后两组线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注(MCAO/IR)模型,实验期间,大鼠自由饮水摄食,普通饲料专人喂养。于术后24h灌胃给药,和血生络方组(HXSLF)灌服等效剂量中药(8ml/kg/d),每天分两次灌胃;假手术组和模型组大鼠灌胃等量生理盐水。给药期间观察大鼠的一般状况;分别在再灌注24h、48h、72h、7d、14d从内眦、外眦取血留标本备用,应用酶联免疫法(ELISA)进行血清VEGF含量检测;于6h、24h、7d进行神经功能评分;采用免疫组化PV染色法,测定缺血局部血管和微血管密度等指标来观察局部血管新生情况。结果:1大鼠一般状况的比较:和血生络方能显著改善脑缺血再灌注后大鼠的一般状况:明显改善大鼠的活动、皮毛光泽度、饮食等状况。2大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能评分:和血生络方组(HXSLF)大鼠神经功能评分远低于模型组大鼠(P<0.01)。3血清VEGF含量:和血生络方组(HXSLF)大鼠血清中各个时间点VEGF含量均显著高于模型组和假手术组(P<0.01);模型组较假手术组血清VEGF含量在各个时间点有升高趋势,但无显著性差异(P>0.05);并且,和血生络方组(HXSLF)大鼠血清VEGF含量维持在较高水平,持续较长时间。4脑梗死组织中微血管密度(MVD):假手术组与正常组比较脑组织中微血管密度(MVD)无差异(P>0.05);和血生络方组(HXSLF)与假手术组和正常组比较脑梗死组织中微血管密度(MVD)显著升高(P<0.01);和血生络方组(HXSLF)与模型组比较脑梗死组织中微血管密度(MVD)显著升高(P<0.01)。结论:依据和血生络法创立的和血生络方可以有效改善动物模型的一般状况,有效保护损伤脑组织,提高生存质量。和血生络方可以降低动物模型脑梗死面积,并且具有明显的促进脑梗死局部血管新生的作用。VEGF是一种重要的血管生成因子,特异性强有力刺激内皮细胞有丝分裂,主要在血管内皮细胞表面有结合位点。缺血缺氧刺激可迅速诱导VEGF表达。和血生络方可以上调血清VEGF表达强度,提示本方具有上调促血管新生因子的作用,从而促进血管新生。本实验的完成证实了和血生络方针对脑缺血这一疾病的促血管新生作用,为本方临床应用于缺血性脑血管疾病的防治提供了理论和实验依据。
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