喹诺酮药物族特异性识别材料及其检测性能的研究

被引量 : 2次 | 上传用户:gxwy1305
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
食品中农兽药多残留的快速筛选检测,是当前及今后一段时期内食品安全检测领域的研究难点和热点之一。本论文针对目前应用较广泛的喹诺酮类药物,研究了DNA以及抗体两种生物材料对其的亲和识别特征,建立了相关的模拟和预测体系,完成了族特异性识别材料的筛选制备;在此基础上建立了食品中喹诺酮多残留的快速筛选技术,对所制备识别材料的应用性能进行了验证和完善。主要研究结果归纳如下:(1)首次采用平衡透析方式研究确定了DNA对于喹诺酮类药物的特异性结合作用、关键参数及主要影响因素。研究表明pH以及Mg2+对于DNA-喹诺酮之间的结合具有显著影响,最适pH处于6—7之间,最适Mg2+浓度为0.5-1.0mM;单链DNA对于恩诺沙星的亲和常数以及结合比约为双链DNA的2倍,而且与恩诺沙星等6种喹诺酮呈现出非常相似的结合性能:亲和常数都处于0.94×105 M-1至2.40×105 M-1之间,而结合比在4.1—6.9之间,显示出较为明显的族特异性识别特征;以未经纯化处理的牛奶为食品样本进行了DNA-恩诺沙星结合能力的验证实验,与缓冲液中的结果没有显著差异,证明所采用的DNA对于喹诺酮具有较高的特异性,可以作为族特异性识别材料用于食品分析等。(2)以单链DNA为喹诺酮识别材料,发展了表面等离子共振生物(SPR)传感器,并以牛奶为样本对其检测性能进行了验证。研究中利用LbL多层累积手段,以PDDA为配体多聚阳离子建立了DNA-PDDA在传感器芯片表面的共固定化技术,固定化DNA数量与LbL循环反应次数之间存在显著的正相关性;适量Mg2+的添加以及牛奶提取液对芯片的预处理,可以有效消除非特异性结合等因素对于检测的干扰;在加标牛奶样本中进行的检测显示出较好的特异性,对于思诺沙星的检测限约为3μg mL-1,批内变异系数<15%,0—120μg mL-1之间呈现较好的线性关系。(3)利用Cerius2软件等建立了分子模拟及预测模型,并在此基础上完成了具有较高族结构特征的喹诺酮半抗原的筛选。对喹诺酮分子的空间构象进行模拟和叠合的结果表明,1位取代基和7位是导致不同药物间构象差异的主要因素,1位与邻近位置间的相互作用会对分子的整体构象产生影响;首次建立了分子空间结构相似度的计算与预测模型,拟合验证表明,结构相似度与抗体交叉反应率之间存在较显著的线性相关性(R=0.7852,P<0.0001),证明该定量模拟模型具有较高的准确度;分子模拟结果表明,培氟沙星、恩诺沙星以及环丙沙星甲基化修饰物具有较高的族内结构相似度。(4)分别制备了培氟沙星和环丙沙星甲基化衍生物抗体,测定表明它们均具有较好的族内识别能力,与前期的分子模拟及预测结果能够较好吻合,其中培氟沙星抗体对所选用10种喹诺酮药物中的9种具有25%以上的交叉反应率,对其中6种的交叉反应率基本达到70%以上。(5)利用培氟沙星抗体为族特异性识别材料,分别建立了ELISA及DIGFA免疫检测方法,鳗鱼加标检测的结果表明,两种方法均能够对恩诺沙星等6种以上的喹诺酮残留实现有效测定,其中ELISA方法对于10μg kg-1和20μg kg-1加标样本的平均回收率基本达到75%以上,相对标准偏差基本处于15%以内;DIGFA检测的检测限为20μg kg-1以下,检测时间可缩短到半小时以内,检测结果可以肉眼读取而不依赖任何仪器,显示出较突出的简便性、快速性和现场适用性。
其他文献
学校艺术教育的社会化与专业化发展影响着艺术教育的属性。文章提出发展学校艺术教育要从以下几方面入手:一要树立科学的艺术教育观,辨明学校艺术教育发展的社会化与专业化趋
目的调查某军医大学学员心理健康状况及相关因素,为制定有效的心理健康干预和心理训练提供科学依据。方法采用症状自评量表(SCL-90)对某军医大学435名学员的心理健康状况进行
目的比较大黄饮片与其免煎颗粒有效成分的含量,了解两者质量的差异。方法以HPLC法测定大黄免煎颗粒与饮片中大黄酚、大黄酸和大黄素含量。结果大黄免煎颗粒中大黄酚、大黄酸
目的:研究偏最小二乘(PLS)方法在不同生长期当归傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分析中的应用。方法:使用正交信号校正及小波压缩(OSCW)对原始FT-IR信号进行预处理,然后对预处理后
加强中国与南美国家的农业合作,对维护全球和中国粮食安全有重要意义。积极推动南美粮食物流新通道建设,着力改进和建立仓储、物流、港口、农产品加工等环节的基础设施,是加
为加深对国际组织各种决策机制的认识,促进国际社会的合作和国际法律秩序的发展,运用比较研究方法对国际组织投票表决制的类型与利弊以及协商一致决策机制的特征与利弊作了细
目的探讨二甲双胍对奥氮平治疗的精神分裂症患者血脂的影响及其与胰岛素抵抗的关系。方法接受奥氮平单药治疗的精神分裂症患者(n=48),加用二甲双胍750 mg/d治疗,疗程8周。分
<正>近期房地产数据不容乐观,但仍有较大调控空间2013年房地产投资占中国GDP的16%,这一投资总量几乎相当于中国香港、新加坡和中国台湾经济总量之和,由此可见房地产对中国经
文章针对医疗机构融资的基本现状,指出融资是医疗机构进一步发展的必然选择,重点就医疗机构融资障碍进行深入分析,并提出相应对策。
本文以筛选具有优良体外发光性能、并对化学污染物敏感的海洋发光细菌为出发点,研究了发光细菌的菌体性质,分离纯化了催化菌体发光的荧光素酶和FMN:NADH氧化还原酶,构建了双