功能化纳米金光学分子探针的构建及其用于三聚氰胺和转基因分析检测

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haorui524
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近年来,我国食品产业发展快速,食品供应总量和种类都有较大增加。然而我国食品安全基础仍然十分薄弱,食品产业量大面广,生产经营管理不规范,部分生产经营者道德失范、诚信缺失,执行食品安全法律法规、标准等方面不到位,产生了很多风险和隐患。同时,对转基因产品的现行监管体制、法规标准、检验检测体系等还不尽完善,风险评估预警水平不高,存在着食品安全监管漏洞。而在食品安全监管能力建设方面,又存在人员不足、装备滞后、检测能力较低等问题。针对目前食品安全检测科技支撑能力薄弱等问题,本文利用纳米金的光学性质构建了纳米金光学分子探针,并分别建立了在液体牛奶中、饲料中以及水溶液中三种检测三聚氰胺的方法。将纳米金探针与表面增强拉曼技术结合,建立了两种检测转基因的方法。本论文的主要内容及研究结果如下:1.制备了特异性识别三聚氰胺的纳米金探针,建立了一种操作简便、灵敏度高、低成本检测液态牛奶中三聚氰胺的方法。纳米金比色探针与三聚氰胺特异性结合形成复合物而发生团聚,引起探针检测液颜色发生变化,从而反映待测样品中三聚氰胺的含量,最低检出限为0.6×10-6 mol/L,低于国家标准要求。本方法样品处理简便,短时间内即可给出检测结果,检测速度快、灵敏高、检出限低,适用于推广至基层牧场开展自律性检测。2.根据三聚氰胺引起纳米金探针团聚后,纳米粒子簇水合粒径发生变化的原理,利用动态光散射技术测定纳米金的水合粒径变化,建立了一种简单灵敏的饲料中三聚氰胺的检测方法。在优化的条件下,对饲料浸提液的检测限为5μg/L,对应饲料中三聚氰胺最低检出限为0.05 mg/kg,低于农业部对饲料原料和饲料产品中三聚氰胺限量值要求。本方法可作为饲料中三聚氰胺标准化检测的补充,推进完善农产品检验检测能力。3.建立了通过对三聚氰胺表面增强拉曼(SERS)特征峰的检测,从而定性定量地分析水溶液中的三聚氰胺的新方法。由于三聚氰胺本身具有拉曼活性,在纳米金表面能够产生SERS信号,结合三聚氰胺引起纳米金探针聚集,长程等离子体耦合等手段进一步放大SERS信号,检测限可达0.5 μmol/L。与三聚氰胺结构类似物的SERS谱图比对结果表明,本方法相对于传统检测方法而言,不仅快速灵敏,而且具有很高的特异性。4.以二氧化硅包裹的纳米金作为SERS探针对不同基因序列进行对应SERS编码,构建了SERS编码的纳米传感器检测系统,实现了对转基因片段和非转基因片段的区分检测。转基因大米和非转基因大米混合样品的测试结果表明本方法能准确检出掺杂量高于0.1%(w/w)混合样品。这项工作不仅为现有转基因技术提供了新的研究方法,还推动了SERS技术在基因水平生物的应用研究。5.通过对目标DNA的识别诱导杂交链反应,引发纳米金探针在检测界面原位聚集链式组装放大信号,建立了一种超微量DNA的SERS检测方法,并用于Bt转基因序列的检测。聚集的纳米金探针携带大量拉曼信号分子,根据SERS响应对目标DNA实现定量检测,检测限可达50 pmol/L。本方法具有普适性,仅需替换引发序列DNA以和目标DNA互补识别就可以推广至对其他DNA或RNA的检测。
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