苏丹红1号,即1-苯基偶氮-2-萘酚,是一种人工合成的油溶性化工染色剂,并被证明是一种潜在的致癌物,在食品中禁止添加。酶联免疫吸附分析法(ELISA)是一种简单、准确的分析方法,具备灵敏度高、特异性强等特点,己广泛应用于临床医学检验、生物分析、食品分析和环境分析等领域中。本实验用自制的免疫抗原免疫动物,制得高质量的抗体,建立了食品中苏丹红I酶联免疫吸附分析方法。实验中合成了两种不同碳桥长度的苏丹红衍生物,并将该衍生物与载体蛋白质交联。衍生物与牛血清蛋白(BSA)的结合物为免疫原(Sudan-C3-BSA, Sudan-C4-BSA),与卵血清白蛋白(OV)的结合物为包被抗原(Sudan-C3-OV, Sudan-C4-OV)。两种免疫原分别免疫两只家兔,获得四种多克隆抗体。两种包被抗原,四种抗体构成8种测试组合,其中有7种组合可用于苏丹红的免疫分析。在这些测试组合中,苏丹红的标准曲线的浓度范围为0.1-100ng/ml,包被抗原的使用浓度为0.02-1 ng/mL,抗血清的使用浓度为0.3-2.0 ng/mL,灵敏度(IC50值)为0.3-2.0 ng/ml (IC50为标准曲线中信号抑制50%所对应的浓度,其值越小,灵敏度越高)。其中最佳组合为:Sudan-C3-OV为包被抗原,兔血清C3-Ⅱ为抗体,IC50值为0.3 ng/ml。四种抗体与苏丹红同系染料Sudan II, III和IV的交叉反应为0.1-14.3%,与食品中的可添加染料日落黄,柠檬黄,苋菜红,胭脂红,亮兰,靛蓝几乎没有交叉反应,说明所制备的四种抗体对苏丹红I都有很高的特异性。选择了六种市售食品用作加标实验样品。经简单的样品处理后,萃取液直接稀释,用于ELISA测定。在六种食品中苏丹红I号的加标回收率为92.4-114%,变异系数为5.9-24.8%。用高效液相色谱仪(HPLC)分析加标样品,并与ELISA分析结果对比。两种方法有较高相关性(r=0.84; n=7)。综上所述,本实验所建立的苏丹红I号分析方法具有灵敏度高、特异性强、样品处理简单、分析快速以及测试量大的特点,可以用于食品中对苏丹红I号的快速筛选和定量分析。