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本研究的目的是测定正常人与白细胞精子症患者精子线粒体DNA（MtDNA）含量、MtDNA4977bp缺失及体内活性氧（ROS）水平，探讨精液中白细胞增加、活性氧水平升高与精子MtDNA变化的关联。经典理论认为：精子在体外运动唯一能量来源是位于其中部线粒体构成的线粒体鞘。线粒体结构、功能的完整性直接影响精子的活力。而精子活力是衡量男性生育能力的重要指标之一。精子线粒体结构、功能很大程度上影响男性的生育力。线粒体的呼吸链是活性氧（Reactive oxygen specias，ROS）的主要来源，正常生理条件下，存在于体内的抗氧化系统可清除过多的ROS；但在某些病理条件下（如：白细胞精子症）可以产生远多于正常情况下的ROS。由于精子线粒体DNA（MtDNA）是无组蛋白包裹裸露的DNA分子、且线粒体内缺乏有效的DNA损伤修复系统，故易造成MtDNA损伤。从而对男性生育能力产生影响。流式细胞仪检测荧光值的方法是利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞进行多参数、快速的定量分析。具有快速、高通量、精确定量的优点。当不发光的1mmol／L 2.7-二氯氢化荧光素二酯（DCFH-DA）进入细胞后，经过酯酶作用脱去二酯（DA），生成不发荧光的2.7-二氯氢化荧光素（DCFH），DCFH被活性氧氧化生成发荧光的2.7-二氯氢化荧光黄（DCF），由于活性氧自由基的含量与荧光探针的荧光强度成正比，因此可以定性定量的检测活性氧自由基的动态变化。通过此种原理我们对对照组与病例组男性精浆中活性氧的含量进行了检测。我们发现对照组与病例组男性精浆活性氧含量存在显著的差异（p值＜0.0001）。这与Saleh等学者发现白细胞精子症患者ROS含量显著增高的结果完全一致。荧光实时定量PCR（Real-time PCR）技术是一项发展的比较成熟的研究手段，目前广泛应用于细胞生物学和分子生物学领域的研究。此种技术具有快速、精确、灵敏的特点，能定量的检测目的基因拷贝数目、表达量的变化，可以对精子线粒体DNA的含量及大片段的缺失情况作出定量检测。本实验采用Percoll梯度离心法将精液样本中的精子分为上清层、30％和80％精子层，分别应用荧光实时定量PCR技术对精子MtDNA含量及MtDNA4977bp缺失进行定量分析。结果表明：上清层、30％层与80％层中，正常组与病例组精子MtDNA平均含量为1.05-9.78个拷贝。与对照组比较，病例组各层精子MtDNA含量均显著升高，其p值均＜0.001。在上清层和80％层，病例组MtDNA4977bp缺失与对照组差异不显著；而在30％层，病例组MtDNA4977bp缺失明显高于对照组（p＜0.0001）。相关分析发现，在对照组与病例组各样本中ROS含量分别与30％层精子和80％层精子的MtDNA含量间呈显著正相关关系（r=0.347，p＜0.0001；r=0.456，p＜0.0001），与上清层精子MtDNA含量无相关性。结论：白细胞增多和活性氧升高可能是导致精子MtDNA含量显著增高的原因之一，但是对于MtDNA4977bp缺失的影响尚没有明确结果，有待进一步研究。。