目的胆管癌,从组织细胞学的角度来说,是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,包括肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC),和肝外胆管癌(extrahepaticcholangiocarcinoma,ECC)其解剖位置特殊,恶性程度高,且起病隐匿,故早期诊断率很低,确诊时往往已到中晚期,失去了根治性切除的机会,预后极差。肿瘤化学治疗效果不佳,耐药性强。研究表明,肿瘤耐药性的发生是肿瘤化学治疗失败的主要原因。自从1970年Biedler等发现多药耐药现象以来,对其研究颇多。而研究证实多药耐药蛋白中的P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是多种肿瘤产生自然生物类抗肿瘤药物耐药的主要耐药蛋白之一,但没有从根本上解决肿瘤的耐药问题。是否存在更稳定,更保守的蛋白来调控已发现的耐药蛋白呢?研究证明,热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)广泛存在于生物界,是进化上具有高度保守性质的蛋白质,在应激状态下具有稳定细胞和保护细胞的重要功能。而P-gp和HSP70是否具有相关性引起了学者的关注。本文通过免疫组化S-P法检测胆管癌组织中P-gp和HSP70的表达,探讨其与肿瘤生物学特征之间的关系,以及两者之间的相互关系。方法1、研究对象98例肝外胆管癌病理标本均取自中国医科大学附属盛京医院病理科(1996.01-2007.03)手术切除原发性肝外胆管癌标本。所有病人术前均未进行放化疗,并经病理确诊。其中男性51例,女性47例,年龄在40-70之间,平均63岁。高/中/低分化胆管癌分别是47/35/16例。淋巴结转移43例,未转移55例。按UICC进行分期:Ⅰ期、Ⅱ期、46例,Ⅲ期、Ⅳ期、52例。2、主要试剂鼠抗HSP70单克隆抗体(1:50),鼠抗P-gp单克隆抗体(1:50),SP试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。3、免疫组织化学染色(SP法)蜡块连续切片,厚度4um。选取一张进行常规HE染色,确定组织学诊断分化程度。检测P-gp和HSP 70在胆管癌组织中的表达,操作严格按试剂盒说明进行。DAB显色。采用SP法对全部标本进行免疫组化染色,染色前用微波炉进行抗原修复。用已知阳性细胞组织切片作为阳性对照,以PBS替代一抗作为阴性对照。4、结果判定全面观察每张切片,随机选择10个高倍视野观察。P-gp根据染色强度、范围计分。染色强度按:无色(0分),淡黄(1分),棕黄(2分),褐黄(3分);染色范围:＜5%(0分),5%～20%(1分),20%～50%(2分),＞50%(3分)。累计0～1分为低表达,＞2分为高表达。HSP70阳性判断标准以出现黄色或棕黄色颗粒为阳性,染色结果分为3级:阳性细胞数＜30%,染色颗粒黄、细、成堆为1级;阳性细胞数30%-60%,染色颗粒深黄、粗、成片为2级;细胞阳性数＞60%,染色颗粒棕黄、粗大、成片为3级。5、统计学处理应用SPSS统计软件进行数据处理。P＜0.05为具有统计学意义。结果1、P-gp和HSP70蛋白的表达P-gp阳性染色主要位于胞膜和胞浆,HSP70阳性染色主要位于胞浆,在所有98例患者中,P-gp蛋白低表达为57例(58.2%),高表达为41例(41.8%)。HSP70蛋白1级染色27例(27.6%),2级染色36例(36.7%),3级染色35例(35.7%)。2、P-gp及HSP70与临床病理参数的关系P-gp蛋白表达与胆管癌分化程度呈正相关(r=0.254,P=0.028),高分化胆管癌组织中P-gp蛋白的含量显著高于低分化的胆管癌组织。P-gp的表达与年龄、性别、淋巴结转移和TNM分期无关。HSP70蛋白表达与胆管癌分化程度呈负相关(r=-0.236,P=0.031),低分化胆管癌组织中HSP70蛋白的含量显著高于高分化的胆管癌组织。HSP70蛋白表达与年龄、性别、淋巴结转移和TNM分期无关。3、HSP70及P-gP表达的关系P-gp蛋白的表达与HSP70蛋白的表达呈负相关(r=-0.352,P=0.001),有统计学意义。结论1、在胆管癌中HSP70和P-gp蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度有相关性。P-gp蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度明显正相关。高分化胆管癌组织中P-gp蛋白的含量显著高于低分化的胆管癌组织。HSP70蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度明显负相关。低分化胆管癌组织中HSP70蛋白的含量显著高于高分化的胆管癌组织。2、在胆管癌中P-gp和HSP70蛋白的表达与年龄,性别,淋巴结转移和TNM分期无关。3、在胆管癌中P-gp蛋白的表达与HSP70蛋白的表达呈负相关。